[发明专利]一种利用标签制备多肽的方法

权利要求书

1.一种利用标签制备多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将编码融合蛋白的基因表达后得到多肽；所述融合蛋白的氨基酸序列自N端到C端顺次包括标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签；

所述C端和N端的标签可以相同也可以不同；

所述多肽两端的酶切位点可以相同也可以不同。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标签包括ThioredoxinA、GST、MBP、SUMO、NusA和DsbA中的一种或两种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述融合蛋白还连接有用于纯化的第二标签；所述第二标签不插入在多肽和酶切位点之间；所述酶切位点包括肠激酶酶切位点、凝血酶酶切位点、Xa因子酶切位点、烟草蚀纹病毒酶切位点、SUMO蛋白酶酶切位点和HRV3C蛋白酶酶切位点中的一种或两种。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二标签的数量为一个以上；

所述融合蛋白的氨基酸序列自N端到C端顺次包括标签-第二标签-酶切位点-多肽-酶切位点-第二标签-标签；或者，标签-酶切位点-多肽-酶切位点-第二标签-标签；或者，标签-第二标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签；或者，第二标签-标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签-第二标签；或者，标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签-第二标签；或者，第二标签-标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多肽包括易降解多肽或高毒性抗菌多肽。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述高毒性抗菌多肽包括A3K/L7K-LAH4；所述A3K/L7K-LAH4的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，靠近C端的酶切位点包括肠激酶酶切位点或凝血酶酶切位点；靠近N端的酶切位点包括肠激酶酶切位点或凝血酶酶切位点。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述易降解多肽包括FP；所述FP的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，酶切位点包括凝血酶酶切位点。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述编码融合蛋白的核苷酸序列与载体连接后表达，所述载体包括pET-32a。