[发明专利]一种利用标签制备多肽的方法

说明书

本发明属于基因工程及多肽制备方法技术领域，具体涉及一种利用标签制备多肽的方法。本发明提供了一种利用标签制备多肽的方法，包括以下步骤：将编码融合蛋白的基因表达后得到多肽；所述融合蛋白的氨基酸序列自N端到C端顺次包括标签‑酶切位点‑多肽‑酶切位点‑标签；所述C端和N端的标签可以相同也可以不同；所述多肽两端的酶切位点可以相同也可以不同。本发明的技术方案可以抑制多肽自身的降解，降低多肽对宿主细胞的毒性和表达宿主的死亡率，使多肽被稳定地表达纯化，从而实现多肽的有效制备。

技术领域

本发明属于基因工程及多肽制备方法技术领域，具体涉及一种利用标签制备多肽的方法。

背景技术

蛋白质的制备是生物医药基础研究中必不可少的一部分，可以通过基因重组技术构建质粒载体，利用助融合标签来辅助蛋白质的表达和纯化。一般常用的辅助蛋白质表达的体系有大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞和昆虫细胞，其中大肠杆菌蛋白质表达系统具有成本低，培养简单，操作方便的优点，被广泛用于工业生产领域。

多肽具有序列短、无结构的特点，且部分多肽具有疏水性强的特点，利用助溶标签辅助疏水性强的多肽蛋白质表达是目前常用的策略，可以增强蛋白质的稳定性、提高其溶解性、实现其纯化。但部分多肽进行表达和纯化时，一端连接标签如ThioredoxinA(TrxA)、GST、MBP、SUMO、NusA和DsbA，依然会出现在蛋白质表达系统中易降解的问题。另外，制备有抗菌活性的多肽如抗菌肽时，会出现诱导表达后多肽蛋白裂解宿主细菌的问题，导致多肽蛋白的表达量低。因此，急需一种制备多肽的方法，解决多肽在表达系统中表达量低、易降解的技术问题。

发明内容

本发明的目的提供一种利用标签制备多肽的方法，应用该方法制备多肽时多肽不易降解，可以提高多肽的表达量。

本发明提供了一种利用标签制备多肽的方法，包括以下步骤：

将编码融合蛋白的基因表达后得到多肽；所述融合蛋白的氨基酸序列自N端到C端顺次包括标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签；

所述C端和N端的标签可以相同也可以不同；

所述多肽两端的酶切位点可以相同也可以不同。

优选的，所述标签包括ThioredoxinA、GST、MBP、SUMO、NusA和DsbA中的一种或两种。

优选的，所述融合蛋白还连接有用于纯化的第二标签；所述第二标签不插入在多肽和酶切位点之间；所述酶切位点包括肠激酶酶切位点、凝血酶酶切位点、Xa因子酶切位点、烟草蚀纹病毒酶切位点、SUMO蛋白酶酶切位点和HRV 3C蛋白酶酶切位点中的一种或两种。

优选的，所述第二标签的数量为一个以上；

所述融合蛋白的氨基酸序列自N端到C端顺次包括标签-第二标签-酶切位点-多肽-酶切位点-第二标签-标签；或者，标签-酶切位点-多肽-酶切位点-第二标签-标签；或者，标签-第二标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签；或者，第二标签-标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签-第二标签；或者，标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签-第二标签；或者，第二标签-标签-酶切位点-多肽-酶切位点-标签。

优选的，所述多肽包括易降解多肽或高毒性抗菌多肽。

优选的，所述高毒性抗菌多肽包括A3K/L7K-LAH4；所述A3K/L7K-LAH4的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

优选的，靠近C端的酶切位点包括肠激酶酶切位点或凝血酶酶切位点；靠近N端的酶切位点包括肠激酶酶切位点或凝血酶酶切位点。

优选的，所述易降解多肽包括FP；所述FP的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

优选的，酶切位点包括凝血酶酶切位点。