[发明专利]液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法

权利要求书

1.一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法,其特征在于，包括如下步骤：

标准样品制备步骤：分别制备不同系列浓度的天冬酰胺标准样品溶液和不同系列浓度的谷氨酰胺标准样品溶液；

样品前处理步骤：将待测样品与蛋白酶溶液混合并酶解，然后过滤，取上清液，得到待测样品溶液，所述蛋白酶溶液包括能用于对待测样品进行酶切的蛋白酶、酶解促进剂和溶剂；

检测步骤:将不同系列浓度的天冬酰胺标准样品溶液、不同系列浓度的谷氨酰胺标准样品溶液和待测样品溶液放入到液质联用仪中进行检测，得到检测数据；

计算步骤：依据天冬酰胺标准样品溶液和谷氨酰胺标准样品溶液的检测数据绘制标准曲线；代入待测样品溶液的检测数据，然后计算，得到待测样品溶液中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶包括灰色链霉菌蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶；所述酶解促进剂包括甲醇和乙腈中的至少一种以及三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂；所述溶剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在样品前处理步骤中还包括向所述上清液中加入天冬酰胺同位素内标溶液以及谷氨酰胺同位素内标溶液。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述样品前处理步骤具体包括：称取待测样品置于容器中，然后再加入蛋白酶溶液并置于恒温培养箱中酶解，然后过滤，取上清液，得到酶解后的样品溶液，往所述样品溶液中加入天冬酰胺同位素内标溶液和谷氨酰胺同位素内标溶液，然后经微孔滤膜过滤，得到待测样品。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在标准样品制备步骤中还包括向天冬酰胺标准样品溶液中加入天冬酰胺同位素内标溶液以及向谷氨酰胺标准样品溶液中加入谷氨酰胺同位素内标溶液。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述计算步骤中还包括依据天冬酰胺标准样品溶液、谷氨酰胺标准样品溶液和待测样品溶液中检测得到的天冬酰胺及其内标物和谷氨酰胺及其内标物的峰面积，计算所述天冬酰胺与天冬酰胺内标物的峰面积的比值和谷氨酰胺与谷氨酰胺内标物的峰面积的比值，绘制浓度-峰面积比值标准曲线，再将待测样品溶液中的天冬酰胺及其内标物峰面积的比值和谷氨酰胺及其内标物的峰面积的比值代入标准曲线，换算即可得到待测样品溶液中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱的色谱柱为五氟苯基柱，所述五氟苯基柱的内径为5μm。

8.如权利要求3-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述天冬酰胺同位素内标溶液包括天冬酰胺-15N₂；所述谷氨酰胺同位素内标溶液包括谷氨酰胺-15N₂。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的流动相包括水和乙腈。