[发明专利]液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法

说明书

一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，包括标准样品制备步骤、样品前处理步骤、检测步骤和计算步骤。标准样品制备步骤包括制备不同系列浓度的标准样品溶液。样品前处理步骤包括将待测样品与蛋白酶溶液混合并酶解，然后过滤，取上清液，得到待测样品溶液。检测步骤包括将不同系列浓度的标准样品溶液和待测样品溶液放入到液质联用仪中进行检测，得到检测数据。计算步骤包括依据标准样品溶液的检测数据绘制标准曲线；代入待测样品溶液的检测数据，然后计算，得到待测样品溶液中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。该方法采用酶解法对待测样品进行前处理，可以提高对食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的检测精度。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法。

背景技术

天冬酰胺(Asn)是一种重要的氨基酸，脑功能的发展离不开Asn。在体氨循环中，Asn扮演重要角色；在氨基酸营养液中，Asn也是不可缺少的组分。谷氨酰胺(GLn)是谷氨酸的酰基，也是二十多种非基本氨基酸中的一种，应用于食品添加剂时，对不同的人群可以起到不同的作用。对于少年儿童来说，摄入适量的GLn，可促进大脑发育，增强记忆力；对于老年人来说，摄入适量的GLn可以保持大脑活动，防止老年痴呆；对于工作繁忙的年轻人来说，摄入适量的GLn可为大脑充电，防止脑部疲劳；另外，GLn还可以帮助病后和术后人群康复。

当前针对Asn和GLn的检测方法处于空白状态，这给日常监管及企业的质量控制带来极大的困难，因此，亟待一种针对食品中Asn和GLn的检测方法。

发明内容

本发明提供一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法。该方法采用酶解法对待测样品进行前处理，可以提高对食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的检测精度。

根据第一方面，一种实施例中提供一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法,包括如下步骤：

样品前处理步骤：将待测样品与蛋白酶溶液混合并酶解，然后过滤，取上清液，得到待测样品溶液，蛋白酶溶液包括能用于对待测样品进行酶切的蛋白酶、酶解促进剂和溶剂；

标准样品制备步骤：分别制备不同系列浓度的天冬酰胺标准样品溶液和不同系列浓度的谷氨酰胺标准样品溶液；

检测步骤：将不同系列浓度的天冬酰胺标准样品溶液、不同系列浓度的谷氨酰胺标准样品溶液和待测样品溶液放入到液质联用仪中进行检测，得到检测数据；

计算步骤：依据天冬酰胺标准样品溶液和谷氨酰胺标准样品溶液的检测数据绘制标准曲线；代入待测样品溶液的检测数据，然后计算，得到待测样品溶液中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

进一步地，蛋白酶包括灰色链霉菌蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶；酶解促进剂包括甲醇和乙腈中的至少一种以及三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂；溶剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂。

进一步地，在样品前处理步骤中还包括向上清液中加入天冬酰胺同位素内标溶液以及谷氨酰胺同位素内标溶液。

本发明提供一种液质联用检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，采用蛋白酶对待测样品进行酶切，获得游离态的天冬酰胺和谷氨酰胺，使得在后续的检测中能够更加精准的测得样品中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

附图说明

图1为Agilent hiLic-z(2.1x100mm，2.7μm)色谱柱的分离色谱图；

图2为Agilent hiLic-z(2.1x100mm，2.7μm)色谱柱的分离色谱图；

图3为Thermo Scientific C18(2.1x100mm，1.7μm)色谱柱的分离色谱图；

图4为Thermo Scientific C18(2.1x100mm，1.7μm)色谱柱的分离色谱图；