[发明专利]一株梯棱羊肚菌单孢杂交菌株JYN04及其选育和应用

权利要求书

1.一株梯棱羊肚菌单孢杂交菌株JYN04，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为武汉大学，保藏日期为2023年2月21日，保藏编号为CCTCCNO：M2023171。

2.权利要求1所述的梯棱羊肚菌单孢杂交菌株JYN04在羊肚菌栽培生产中的应用。

3.权利要求1所述梯棱羊肚菌单孢杂交菌JYN04的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取野生梯棱羊肚菌，对菌柄部位进行组织分离，获得纯培养，将纯培养后的菌株作为亲本；

(2)获取所述亲本的子囊孢子；

(3)挑取单个子囊孢子进行培养，待子囊孢子萌发至1～1.5cm直径的菌落时，取菌尖端至新的培养基，得单孢菌株群体；

(4)挑选性状优于所述亲本菌株的单孢菌株为候选亲本菌株；

(5)对亲本、单孢菌株进行交配型基因检测；

(6)分别选取只含有Mat1-1-1基因型和只含有Mat1-2-1基因型的候选亲本菌株；将只含有Mat1-1-1基因型和只含有Mat1-2-1基因型的候选亲本菌株配对杂交得杂交子；

(7)选取菌落形态均匀、菌核均匀、14天培养无色素，继代培养寿命大于2400小时的杂交子为候选杂交子；

(8)对亲本菌株和所述候选杂交子菌株进行栽培试验和农艺性状考评，选择产量、农艺性状和抗性优于亲本的候选杂交子，为梯棱羊肚菌单孢杂交菌JYN04；

(9)对杂交子与亲本菌株通过拮抗和SRAP分子标记扩增试验，验证其为不同于亲本菌株的新杂交菌株。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中获得所述子囊孢子的方法为：通过常规的大田栽培获得亲本菌株的成熟子囊果，将所述子囊果悬挂在培养皿上方3～5cm处，10～12h后，在培养皿中获得所述子囊孢子。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养为倒置培养，培养温度为22～25℃，培养时间为2～3天。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(4)中候选亲本菌株的性状为：24℃恒温培养14天不产生棕色、浅棕色或棕黄色色素，菌落颜色为白色，培养5-7天开始产生菌核，菌核密度随着培养时间延长而增大增多，且候选优良菌株的菌丝寿命均大于2400小时，总生长距离大于150cm。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(6)所述杂交为：将Mat1-1-1候选亲本菌株和Mat1-2-1候选亲本菌株分别接种在同一培养皿中，接种距离为2.5～3.5cm，待两个菌落接触后，以距离接触线0.3～0.5cm×0.3～0.5cm的区域作为候选杂交菌株区，获得区域内的杂交菌株。

8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(9)所述杂交子验证的拮抗实验具体为：将候选杂交子、亲本菌株进行组合配对，24℃恒温培养14天，观察配对菌落是否有拮抗线产生。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(9)所述杂交子验证的SRAP分子标记扩增试验具体包括：DNA提取、PCR扩增、电泳检测和特征性条带统计。