[发明专利]一种抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽及其制备方法

权利要求书

1.抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽，选自如SEQ ID NO.1～2任一所述的肽。

2.根据要求1所述的牡丹肽，其特征在于，所述牡丹肽来源于凤丹油用牡丹苗(Paeoniaostii“FengDan”)叶。

3.抗疲劳抗氧化功效的牡丹肽胶囊，其包含如SEQ ID NO.1～2任一所述的肽。

4.权利要求1所述的牡丹肽的制备方法，其特征在于，包括：

制备凤丹叶提取粗品；

根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品；

将所述牡丹蛋白品分别进行胃蛋白酶解、胰蛋白酶酶解和蜗牛酶酶解的步骤，得到酶解液，从所述酶解液中分离得到所述牡丹肽。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，“根据所述凤丹叶粗品制备牡丹蛋白品”的步骤包括：

将所述凤丹叶粗品用PVPP和二氧化碳的混合物于液氮预冷的研钵中研磨成粉末；

将所述粉末加入BPP提取缓冲液中震荡提取，进行第一离心；

取所述第一离心的上清液与BPP提取缓冲液混合震荡提取，进行第二离心；

取所述第二离心的上清液与预冷的15％的聚丙烯酰胺水溶液混合，-20℃冰箱中沉淀12h以上，进行第三离心；

取所述第三离心的沉淀物加入植物蛋白提取裂解液，放置于22℃恒温裂解2h以上，冷冻干燥，即可得到所述牡丹蛋白品。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，“胃蛋白酶酶解”的步骤包括：

将所述牡丹蛋白品混入至10倍重量的去离子水中，匀浆，调节pH至2.0，加入所述牡丹蛋白品重量1％的胃蛋白酶，于37℃酶解2h；迅速放入100℃水浴10min，使酶失活。所得酶解液4000rpm离心10min，取上清液。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，“胰蛋白酶酶解”的步骤包括：

将权利要求5所得的上清液用0.05M的氢氧化钠溶液调节pH至8.0，加入牡丹蛋白品重量1％的胰蛋白酶，于40℃酶解4h后，迅速放入100℃水浴10min，使酶失活。所得酶解液4000rpm离心10min，取上清液，滤纸滤过，微滤，滤液浓缩后，冷冻干燥。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，“蜗牛酶酶解”的步骤包括：

将权利要求7所得的冻干品混入至10倍质量的去离子水中，1000rpm匀浆1min后，用0.05M的盐酸溶液调节pH至6.2，加入牡丹蛋白品质量2.6％的蜗牛酶，于49℃酶解28h，迅速放入100℃水浴10min，使酶失活；所得酶解液8000rpm离心20min，上清液经0.45μm滤膜微滤后，收集滤液，依次过5kD、3kD和1kD的超滤膜，收集5kD～3kD、3kD～1kD和1kD的3个部分的滤液，适当浓缩，冷冻干燥，即得不同分子量段的牡丹肽。

9.权利要求3所述的牡丹肽胶囊的制备方法，其特征在于，包括：

分别用pH为7.0的Tris-HCl缓冲液配制权利要求2所述的牡丹肽溶液；

分别取所述牡丹肽溶液溶液100mL，与40mg/mL的海藻酸钠溶液混合，40℃、120rpm震荡水浴20min后，用5mL注射器吸取5mL混合溶液，滴入100mL、3.5mg/mL的氯化钙溶液中，恒温固化30min，固化结束后抽滤，沉淀置于45℃烘箱烘干，即为牡丹肽胶囊。

10.权利要求1所述的牡丹肽在制备抗氧化抗疲劳的固体饮料及制剂中的应用。