[发明专利]一种用于预测儿童神经母细胞瘤复发的检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.BDNF作为标志物在制备用于预测儿童神经母细胞瘤复发的产品中的应用。

2.检测BDNF表达水平的试剂在制备用于预测儿童神经母细胞瘤复发的产品中的应用。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片或试剂盒。

4.一种用于预测儿童神经母细胞瘤复发的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测BDNF表达水平的试剂。

5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于预测儿童神经母细胞瘤复发的ELISA检测试剂盒。

6.如权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括：

BDNF抗原、BDNF单克隆抗体、质控品、BDNF标准品、偶联抗体、底物液和终止液。

7.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述BDNF抗原为含有BDNF合成肽的Tris缓冲液，在Tris缓冲液中，所述BDNF合成肽的质量浓度为4.5～5.5μg/ml。

8.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述质控品为含有BDNF合成肽的冻干粉的Tris缓冲液，在Tris缓冲液中，所述BDNF合成肽的质量浓度为1.4～1.6μg/L或4.25～4.6μg/L。

9.如权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述BDNF标准品包括标准品0～5；所述标准品0为不含有BDNF合成肽的冻干粉的Tris缓冲液；所述标准品1～5为含有BDNF合成肽的冻干粉的Tris缓冲液1～5，在Tris缓冲液1中，所述BDNF合成肽的质量浓度为0.75μg/L；在Tris缓冲液2中，所述BDNF合成肽的质量浓度为1.25μg/L；在Tris缓冲液3中，所述BDNF合成肽的质量浓度为2.50μg/L；在Tris缓冲液4中，所述BDNF合成肽的质量浓度为5.00μg/L；在Tris缓冲液5中，所述BDNF合成肽的质量浓度为10.00μg/L。

10.一种非疾病诊断和治疗目的的如权利要求4～9任一项所述的检测试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)向BDNF微孔板中加入生物素标记的BDNF抗原，孵育；

2)在步骤1)的BDNF微孔板中加入BDNF标准品、质控品及血清样，再加入BDNF单克隆抗体，混合孵育，形成抗原抗体复合物；

3)向步骤2)的BDNF微孔板中加入过氧化物酶偶联抗体，通过孵育将过氧化物酶偶联抗体和抗原抗体复合物进一步结合；

4)向步骤3)的BDNF微孔板中加入底物液，孵育，再加入终止液，在2小时内以650nm为参照测定450nm下的吸光度，根据标准品回归拟合的标准曲线计算质控品及血清样中的BDNF浓度值。