[发明专利]一种用于预测儿童神经母细胞瘤复发的检测试剂盒及其应用

说明书

本申请涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于预测儿童神经母细胞瘤复发的检测试剂盒及其应用。本申请的检测试剂盒可以快速检测血清中BDNF表达水平变化，通过对儿童神经母细胞瘤发生机制的深入研究，发现神经母细胞瘤患儿血清中BDNF的浓度水平高低以及治疗后BDNF的浓度变化可以成为预测高危NB患儿治疗后是否复发的有效指标；本申请的检测方法在保证高敏感性和特异性的情况下，较传统ELISA法可以缩短实验时间达4小时以上，大大缩短了检测时间，减少人员操作误差导致假阳性或假阴性，保证检测结果的一致性。从而为儿童神经母细胞瘤的预后评价提供有效的临床指导意义。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于预测儿童神经母细胞瘤的复发的检测试剂盒及其应用。

背景技术

神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)是儿童常见的恶性实体肿瘤，发病率约为(0.3～5.5)/10万，80％病例发生于5岁以下儿童。NB起源于原始神经嵴细胞，具有原发部位隐匿、早期诊断困难、恶性程度高、发展迅速和早期转移等临床特点，高危NB患儿即使经过积极治疗，仍有50％的患儿出现复发，远期生存率极低，属公认的儿童肿瘤难治症。尝试建立能有效预测复发的检测指标以对NB患儿进行预后判断以及应用针对性的“个体化”分层治疗方案，对提高NB患儿的长期存活具有重要意义。

脑神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor，BDNF)是一类分子量为12.3KD的碱性蛋白质，由119个氨基酸残基构成，并含有3对二硫键，在体内以二聚体的形式存在，主要分布在中枢神经系统，并对多种类型神经元的生长、发育、分化、维护和再生具有重要作用。研究发现原肌球蛋白酪氨酸激酶受体家族(Trk)成员之一的TrkB是BDNF的高亲和性受体，高表达TrkB的NB肿瘤细胞增殖快且容易发生远处侵袭性转移；BDNF与NB细胞上的TrkB受体结合后，TrkB受体发生同源二聚体化导致其胞内段的酪氨酸激酶区域活化，从而启动NB肿瘤细胞内信号级联反应：(1)激活PI3K/AKT通路，抑制凋亡蛋白的活性加快肿瘤生长，(2)激活Ras/MAPK信号通路，激活抗凋亡蛋白，促进肿瘤生长及转移(图1)。

目前已证实BDNF/TrkB信号转导通路与NB的发生及不良预后有关，且TrB的高表达也为高危NB公认的标志之一。本申请人的前期研究亦与其他研究者的报道一致，显示BDNF的高亲和性受体TrkB在预后不良的4期NB中的表达阳性率为100％，但高危NB的患儿如何能准确地预测其在接受相应的治疗方案后会否复发？仍是目前儿童肿瘤临床诊治中面临的挑战。

目前检测血清中BDNF水平的方法多采用酶联免疫吸附法(ELISA法)，传统夹心ELISA利用的是一对能够结合于靶蛋白上至少两个不同位点的抗体。捕获抗体预包被于微孔板的微孔表面，并与靶蛋白选择性结合。清洗后，加入检测抗体，连接到靶蛋白的第二位点，形成夹心复合物。该方法具有高灵敏、高专一性的特点，但实验的操作时间需要5小时以上，主要原因是一抗抗体的特异性结合力较差，标准品的制备步骤繁琐。

因此，亟需一种可以缩短时间、简化标准品的检测血清中BDNF水平的试剂盒。

发明内容

本申请的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于预测儿童神经母细胞瘤复发的检测试剂盒及其应用。本申请制备的检测试剂盒可以快速检测血清中BDNF表达水平变化，在保证高敏感性和特异性的情况下，可大大缩短检测时间，减少人员操作误差导致假阳性或假阴性，保证检测结果的一致性，为儿童神经母细胞瘤的预后评价提供有效的临床指导意义。

为实现上述目的，本申请采取的技术方案为：

第一目的，本申请提供了一种BDNF作为标志物在制备用于预测儿童神经母细胞瘤复发的产品中的应用。

第二目的，本申请提供了检测BDNF表达水平的试剂在制备用于预测儿童神经母细胞瘤复发的产品中的应用。所述BDNF标志物在复发神经母细胞瘤患儿血清中的表达水平要高于缓解神经母细胞瘤患儿血清。