[发明专利]一种提高他克莫司产量的方法

权利要求书

1.一种提高他克莫司产量的方法，其特征在于，将筑波链霉菌用氧化剂处理，得到氧化应激孢子，再将氧化应激孢子接入发酵培养基，按常规方法发酵，获得含他克莫司发酵液，将发酵液分离纯化即可。

2.如权利要求1所述的方法，所述氧化剂处理包含以下步骤：

A.将筑波链霉菌接至平板培养基，温度20-30℃培养7-10d，得到筑波链霉菌孢子，用无菌水洗脱孢子，经研磨稀释得到孢子悬液；

B.将孢子悬液接入种子培养基中，温度28℃，转速200-300rpm，培养24-60h，得到筑波链霉菌种子液；

C.在发酵培养基中加入氧化剂，摇匀后迅速加入上一步获得的种子液，温度20-30℃，转速200-300rpm培养1-7d，获得氧化剂处理的发酵液；

D.取步骤C获得的发酵液加入无菌水稀释至适当菌体细胞浓度，混匀后涂布培养平板，在温度20-30℃下培养7-9d，得到氧化应激孢子。

3.如权利要求2所述的方法，所述步骤A的培养温度为28℃，步骤B的转速为240rpm，培养时间为48h；步骤C的培养温度为25℃，转速为220rpm，培养时间为2-4d；步骤D的培养温度为28℃。

4.如权利要求2所述的方法，所述步骤C所述氧化剂为过氧化氢；所述氧化剂的加入量为0.01％-1％，优选0.3％-0.5％。

5.如权利要求2所述的方法，步骤D中所述的菌体细胞浓度为10⁷～10⁸CFU/ml。

6.如权利要求2所述的方法，所述平板培养基组成为(g/L)：可溶性淀粉1、K₂HPO₄ 1、NaCl 1、MgSO₄·7H₂O 1、(NH₄)₂SO₄ 2、CaCO₃ 2、FeSO₄·7H₂O 0.001、MnCl₂·4H₂O 0.001、ZnSO₄·7H₂O 0.001、琼脂15，pH7.0-7.4；

所述种子培养基组成为(g/L)：可溶性淀粉15、葡萄糖10、花生饼粉5、玉米浆干粉5、甘油5、酵母粉5、CaCO₃ 2，pH7.0；

所述发酵培养基组成为(g/L)：糊精40、玉米淀粉30、可溶性淀粉20、葡萄糖13、玉米浆干粉6、甘油10、酵母粉12、酵母浸粉8、L-精氨酸2、哌啶-2-甲酸1、CuSO₄·5H₂O0.1、MgSO₄0.5、CaCO₃ 1，pH7.0。