[发明专利]一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂、制备方法及应用

权利要求书

1.一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂，其特征在于：所述佐剂采用甘露糖和疏水烷基结构对聚乙烯亚胺进行双重修饰，其结构如结构式（1）所示：

（1），

（2），（3）

其中，100≤n+m≤1500，其中n与m均取整数；R₁为H或如结构式（2）所示的取代基，其中x=1-20，R₂为H或结构式（3）的取代基或与R₁相同的取代基。

2.根据权利要求1所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂，其特征在于：所述聚乙烯亚胺为支化聚乙烯亚胺，其分子量为4800~70000。

3.一种如权利要求1所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述制备方法采用支化聚乙烯亚胺分子为基体，将疏水烷基酰氯与聚乙烯亚胺分子进行酰胺反应，制备出疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺聚合物；并在聚合后与甘露糖进行亲核加成反应，制备出甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的支化聚乙烯亚胺佐剂，所述的制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将疏水烷基酰氯和溶剂加入烧瓶中搅拌溶解；另将支化聚乙烯亚胺溶于相同的溶剂中，并加入缚酸剂，在5℃下，使用恒压滴液漏斗将溶于溶剂的疏水烷基酰氯滴加到溶于溶剂的支化聚乙烯亚胺和缚酸剂溶液中，搅拌反应12~24小时，用异丙醚洗涤沉淀，25℃真空烘箱干燥，制备出疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺；

步骤b、取疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺溶于纯化水中，加入甘露糖，升温至75~95℃反应1~3小时，透析冷冻干燥，制备出甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的聚乙烯亚胺。

4.根据权利要求3所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，疏水烷基酰氯与聚乙烯亚胺的摩尔比为0.25~1：100。

5.根据权利要求3所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤b中，甘露糖与聚乙烯亚胺的摩尔比为0.5：10~100。

6.根据权利要求3所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述疏水烷基酰氯为辛酰氯、十二酰氯、肉豆蔻酰氯、棕榈酰氯和硬脂酰氯中的一种或多种。

7.根据权利要求3所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述缚酸剂为三乙胺、吡啶和三乙醇胺中的一种或多种；所述溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷和二甲基亚砜中的一种或多种。

8.根据权利要求7所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，缚酸剂与聚乙烯亚胺的摩尔比为0.25~1：100。

9.一种如权利要求1所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的应用，其特征在于：所述佐剂用于传递卵清蛋白（OVA）、BSA蛋白类或DNA、mRNA类抗原，所述佐剂与抗原的结合步骤为：将甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的聚乙烯亚胺用去离子水稀释为浓度为1 mg/mL的聚乙烯亚胺溶液，用盐酸溶液调整pH值为7.0~7.4，将抗原用去离子水溶解为浓度为5 mg/mL的备用液，将抗原备用液与甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的聚乙烯亚胺溶液采用物理混合方法混合得到聚乙烯亚胺与抗原复合纳米粒子体系。

10.根据权利要求9所述的动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的应用，其特征在于：所述物理混合方法为磁力搅拌法、涡旋仪混合法或手动混合法中的一种，聚乙烯亚胺与抗原复合纳米粒子的粒径小于200 nm。