[发明专利]一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂、制备方法及应用

说明书

一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂，采用甘露糖和疏水烷基结构对聚乙烯亚胺进行双重修饰，其结构如结构式（1）所示：（1），（2），（3），其中，100≤n+m≤1500，其中n与m均取整数；Rsubgt;1/subgt;为H或如结构式（2）所示的取代基，其中x=1~20，Rsubgt;2/subgt;为H或结构式（3）的取代基或与Rsubgt;1/subgt;相同的取代基。本发明采用甘露糖、疏水性烷基酰氯进行双重修饰，降低了聚乙烯亚胺的细胞毒性。

技术领域

本发明涉及一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂、制备方法及应用，属于生物医用材料合成技术领域和动物疫苗佐剂领域。

背景技术

疫苗是一种用于预防疾病发生的生物制品，常规的疫苗通常由抗原和佐剂两部分组成。疫苗佐剂是一种非特异性的免疫增强剂，本身无免疫原性或低免疫原性，疫苗佐剂有助于减少免疫接种次数和抗原使用量。当佐剂与抗原同时或预先注射进入机体可以有效增强抗原的特异性免疫应答。目前，阳离子型聚合物佐剂的出现为疫苗佐剂提供一种新的发展方向，聚合物表面带正电荷可延长疫苗在注射部位停留、增加抗原递呈作用、延长刺激体内免疫细胞时间。

聚乙烯亚胺（PEI）是表面带有高密度正电荷的阳离子型聚合物，PEI的骨架中每3个原子就包含一个氮原子，在溶酶体中可形成非晶网络结构，且具有胞内的“质子海绵效应”。其优异的质子海绵效应可以有效促进抗原的胞内高效释放。因此，基于PEI的理化性质，作为佐剂在非病毒类抗原载体领域备受瞩目。

聚乙烯亚胺虽然具有很好的质子海绵效应，但是在细胞内化作用时，因为其含有大量的正电荷，可能带来细胞毒性作用。

发明内容

本发明为克服现有技术弊端，提供一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂及其制备方法，聚乙烯亚胺佐剂采用甘露糖、疏水性烷基酰氯进行双重修饰，降低了聚乙烯亚胺的细胞毒性。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂，所述佐剂采用甘露糖和疏水烷基结构对聚乙烯亚胺进行双重修饰，其结构如结构式（1）所示：

（1），

（2），（3）

其中，100≤n+m≤1500，其中n与m均取整数；R₁为H或如结构式（2）所示的取代基，其中x=1~20，R₂为H或结构式（3）的取代基或与R₁相同的取代基。

上述动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂，所述聚乙烯亚胺为支化聚乙烯亚胺，其分子量为4800~70000。

一种动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，所述制备方法采用支化聚乙烯亚胺分子为基体，将疏水烷基酰氯与聚乙烯亚胺分子进行酰胺反应，制备出疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺聚合物；并在聚合后与甘露糖进行亲核加成反应，制备出甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的支化聚乙烯亚胺佐剂，所述的制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将疏水烷基酰氯和溶剂加入烧瓶中搅拌溶解；另将支化聚乙烯亚胺溶于相同的溶剂中，并加入缚酸剂，在5℃下，使用恒压滴液漏斗将溶于溶剂的疏水烷基酰氯滴加到溶于溶剂的支化聚乙烯亚胺和缚酸剂溶液中，搅拌反应12-24小时，用异丙醚洗涤沉淀，25℃真空烘箱干燥，制备出疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺；

步骤b、取疏水烷基结构修饰的聚乙烯亚胺溶于纯化水中，加入甘露糖，升温至75~95℃反应1~3小时，透析冷冻干燥，制备出甘露糖和疏水烷基结构双重修饰的聚乙烯亚胺。

上述动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，所述步骤a中，疏水烷基酰氯与聚乙烯亚胺的摩尔比为0.25~1：100。

上述动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，所述步骤b中，甘露糖与聚乙烯亚胺的摩尔比为0.5：10~100。

上述动物疫苗用聚乙烯亚胺佐剂的制备方法，所述疏水烷基酰氯为辛酰氯、十二酰氯、肉豆蔻酰氯、棕榈酰氯和硬脂酰氯中的一种或多种。