[发明专利]一种固定化双酶树脂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种固定化双酶树脂，其特征在于，包括树脂载体以及连接在所述树脂载体上的烯还原酶以及醇脱氢酶。

2.根据权利要求1所述的一种固定化双酶树脂，其特征在于，所述树脂载体为环氧树脂、伯氨基树脂中的任意一种或两种的组合。

3.根据权利要求2所述的一种固定化双酶树脂，其特征在于，所述环氧树脂中包含有如下式(1)、式(2)中的任意一种或两种的组合的环氧官能团：

4.根据权利要求2或3所述的一种固定化双酶树脂，其特征在于，所述环氧树脂为LX-1000EP环氧树脂、LX-1000EPA环氧树脂、LX-103B环氧树脂、ES-103B环氧树脂、ES-109环氧树脂中的任意一种或多种的组合。

5.一种制备如权利要求1～4中任意一项所述的固定化双酶树脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(S.1)发酵制备烯还原酶发酵液和醇脱氢酶发酵液并混合均匀得到混合发酵双酶液；

(S.2)将步骤(S.1)中得到的混合发酵双酶液破碎、重悬、离心后得到包含有烯还原酶和醇脱氢酶的双酶粗酶混合液；

(S.3)将树脂载体加入步骤(S.2)中得到的双酶粗酶混合液中，使得树脂载体与烯还原酶和醇脱氢酶交联反应，得到固定化双酶树脂。

6.根据权利要求5所述的一种制备固定化双酶树脂的方法，其特征在于，

所述步骤(S.3)中双酶粗酶混合液中含有的烯还原酶与树脂载体的相对用量为1×10^-5～1×10^-2U/g，双酶粗酶混合液中含有的醇脱氢酶与树脂载体的相对用量为10～1000U/g；

所述步骤(S.3)中反应时间为1～24h，反应温度为10～40℃。

7.一种如权利要求1～4中任意一项所述的固定化双酶树脂在不对称加氢还原4-丙基呋喃-2(5H)-酮中的应用。

8.一种(R)-二氢-4-丙基-2(3H)-呋喃酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

在如权利要求1～4中任意一项所述的固定化双酶树脂的催化下，将4-丙基呋喃-2(5H)-酮进行还原反应，得到(R)-二氢-4-丙基-2(3H)-呋喃酮。

9.根据权利要求8所述的一种(R)-二氢-4-丙基-2(3H)-呋喃酮的制备方法，其特征在于，所述4-丙基呋喃-2(5H)-酮的浓度为0.1～100g/L。

10.根据权利要求8所述的一种(R)-二氢-4-丙基-2(3H)-呋喃酮的制备方法，其特征在于，

在所述还原反应过程中需加入NADP⁺，所述NADP⁺的浓度为1mmol/L～100mmol/L；

在所述还原反应过程中需添加异丙醇，所述异丙醇的浓度为1～20wt％；

在所述还原反应过程中固定化双酶树脂的添加量为1～50wt％。