[发明专利]一种羊小肠粘膜糖蛋白的提取分离纯化方法及其应用

说明书

本发明公开了一种羊小肠粘膜糖蛋白的提取分离纯化方法及其应用，该方法取新鲜羊小肠，自来水洗净肠腔内容物后，刮取羊小肠粘膜，冷冻干燥，研钵研磨得羊小肠冻干粉，再用磷酸盐缓冲溶液(PBS)低温提取，过滤，滤液冷冻干燥得到羊小肠粗提物，将粗提物透析脱盐，通过离子交换柱层析，凝胶柱层析，高效液相色谱（HPLC）分离纯化得到糖蛋白，并用HPLC分析单糖组成，结果表明：该糖蛋白含有氨基半乳糖，证明为一类含有O‑型糖苷键的糖蛋白。通过本发明所述方法获得的羊小肠粘膜糖蛋白经体外抗肿瘤活性实验证实，该糖蛋白具有抑制结肠癌细胞生长的活性。本方法制备工艺简单，成本低，安全性高，提取率高，重复性高，性质稳定，纯度高适合应用于医药和食品保健品领域等优点。

技术领域

本发明涉及一种天然来源糖蛋白的开发和应用领域，尤其涉及一种羊小肠粘膜糖蛋白的提取分离纯化方法及其用途。

背景技术

糖蛋白是一种含有寡糖链的蛋白质，糖链是转移修饰后糖基化连接在蛋白质上的；糖和蛋白质之间以共价键的形式连接，广泛存在于植物、动物和微生物中，糖蛋白在动物中占比极高，许多维持生物机体正常反应如细胞间膜反应的蛋白均是一类糖蛋白，因此糖蛋白的特异性极高，近年来对糖蛋白的研究日益增多，许多研究发现它具有显著的药用功效和保健功能，如免疫调节、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等。

结肠癌是指肠道内的结肠细胞增生，产生病变，出现肿瘤的癌症疾病。根据不同的病症可以将结肠癌分为两种，分别是左半结肠癌和右半结肠癌。结肠癌在我国是一种常见病，并且是世界上最常见的恶性肿瘤之一，发病率在整个恶性肿瘤中居第3位。目前，临床上治疗结肠癌的方法有手术、放化疗等，但均存在预后性差、易产生耐药性等不足。结肠癌预防和前期轻症治疗的相关上市药物较少，因此，以抑制结肠癌细胞生长为基础的药物的研发应即刻开展。

肠道是生物体重要的消化器官，是消化管中最长的一段，也是功能最重要的一段。羊的肠包括小肠、大肠和直肠。来自于胃和胰腺的消化液通过导管排入小肠内，因此小肠是机体消化反应和产物吸收的主要场所。经过大量资料检索，以小肠粘膜为原料提取过的活性物质主要有肝素和肝素钠(粘多糖硫酸酯类物质)和碱性磷酸酶(非特异性磷酸单酯酶)，以