[发明专利]牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统、方法及应用有效
| 申请号： | 202310524020.8 | 申请日： | 2023-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN116286905B | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 杨磊;郝振廷;白春玲;刘雪霏;苏广华;李光鹏 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/55 | 分类号： | C12N15/55;C12N15/113;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京华清迪源知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 朱芳 |
| 地址： | 010000 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 牛源化 crispr bocas9 基因 编辑 系统 方法 应用 | ||
1.利用牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统进行基因编辑方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）分别构建boCas9表达载体和sgRNA表达载体；
（2）将所述boCas9表达载体和sgRNA表达载体共转染牛源细胞；
（3）对牛源细胞靶基因的切割效率进行检测；
所述牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统包括boCas9蛋白和sgRNA；编码所述boCas9蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述sgRNA选自sgRNA1-5中任一种，其中，
sgRNA1的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反义链的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示；
sgRNA2的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，反义链的核苷酸序列如SEQ IDNO.5所示；
sgRNA3的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，反义链的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示；
sgRNA4的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，反义链的核苷酸序列如SEQ IDNO.9所示；
sgRNA5的正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，反义链的核苷酸序列如SEQ IDNO.11所示。
2.根据权利要求1所述的基因编辑方法，其特征在于，将所述boCas9基因序列构建在pSpCas9载体上，获得pboCas9表达载体。
3.根据权利要求1所述的基因编辑方法，其特征在于，所述靶基因为MSTN、Rosa26、HEBP1、LDLR或PRNP。
4.根据权利要求1所述的基因编辑方法，其特征在于，
采用T7E1酶切法进行切割效率检测。
5.权利要求1所述的牛源化CRISPR/boCas9基因编辑系统在编辑牛源细胞DNA中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述编辑包括基因靶向切除、插入或修饰。
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