[发明专利]用于甲状腺癌检测的数字PCR试剂盒有效
| 申请号： | 202310534174.5 | 申请日： | 2023-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN116254346B | 公开（公告）日： | 2023-08-04 |
| 发明（设计）人： | 祝令香;程寻;杨文军 | 申请（专利权）人： | 北京新羿生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 北京玄法律师事务所 16002 | 代理人： | 潘满根 |
| 地址： | 100081 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 甲状腺癌 检测 数字 pcr 试剂盒 | ||
1.一种用于甲状腺癌检测的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述数字PCR试剂盒用于同时检测TERT-C250T、TERT-C228T和BRAF V600E突变，所述试剂盒包括试剂盒缓冲体系、引物和探针，所述试剂盒中缓冲体系包括Tris-HCl、甘油、dNTPs、KCl、MgCl2、Taq DNA聚合酶、UNG酶、甜菜碱和甲酰胺，所述甜菜碱终浓度为0.4~0.6M，所述甲酰胺终体积浓度为0.5%-2%和所述Taq DNA聚合酶使用量为每30微升反应体系中终使用量为3U以上；
TERT基因上游引物SEQ ID No.1:5’-CCTGCCCCTTCACCTTCCAG-3’，TERT基因下游引物SEQ ID No.2:5’-AGCGCTGCCTGAAACTCG-3’，TERT基因野生型探针 SEQ ID No.3:5’-CAGCC+CCTT+CCGGG-3’，TERT-C228T突变型探针 SEQ ID No.4:5’-GACCC+CT+TC+CGGGTC-3’，TERT-C250T突变型探针 SEQ ID No.5:5’-CGACCCCT+CCCGGG-3’，BRAF基因上游引物 SEQ IDNo.6:5’-CATGAAGACCTCACAGTAAAAATAGG-3’，BRAF基因下游引物 SEQ ID No.7:5’-CAACTGTTCAAACTGATGGGACC-3’，BRAF V600E突变型探针 SEQ ID No.8:5’-AG+CTA+CAGAGAAAT+CTCGATG - 3'，BRAF 野生型探针 SEQ ID No.9：5’ AG+CTA+CAGTGAAAT+CTCGATG-3'；
所述Tris-HCl终浓度为0.04-0.05M；所述甘油终体积浓度为4-8%；所述KCl终浓度为20-50mM；所述MgCl2终浓度为2-6mM；所述UNG使用量为每30微升反应体系中终使用量为0.2U以上；所述dNTPs中dATP:dUTP、dCTP:dUTP、dGTP:dUTP的物质量比例都为1:2到1:3之间。
2.根据权利要求1所述的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述Taq DNA聚合酶使用量为每30微升反应体系中终使用量为为3~4U。
3.据权利要求1所述的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述UNG酶使用量为每30微升反应体系中终使用量为0.2-0.4U。
4.根据权利要求1所述的数字PCR试剂盒，其特征在于，所述引物浓度为不小于400nM，探针浓度为不小于200nM。
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