[发明专利]一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法

权利要求书

1.一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1、选取序列完全不同的单向RNA1(1)、单向RNA2(2)、单向RNA3(3)和单向RNA4(4)备用，选取单细胞克隆扩增制备具有13个编辑位点的谱系条形码(5)备用；

S2、采用细胞谱系条形码技术对单向RNA1(1)、单向RNA2(2)、单向RNA3(3)和单向RNA4(4)分别与谱系条形码(5)的13个编辑位点匹配，得到谱系条形码(5)序列；

S3、将S1所述的谱系条形码(5)与绿色荧光蛋白基因及抗性基因组成一个融合基因；

S4、采用单细胞测序平台捕获S3所述具有融合基因的谱系条形码(5)。

2.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S1中，单细胞克隆扩增时长为10天。

3.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S2中，所述单向RNA1(1)与谱系条形码(5)的13个编辑位点中2个以上的编辑位点错配。

4.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S2中，所述单向RNA2(2)、单向RNA3(3)和单向RNA4(4)分别与谱系条形码(5)的第9、12和13编辑位点匹配。

5.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S2中，跟据错配碱基数量及碱基类型的差异，单向RNA1(1)、单向RNA2(2)与谱系条形码(5)的13个编辑位点的编辑效率逐渐降低。

6.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S2中，谱系条形码(5)跨编辑位点缺失突变的比例为8.8％，且单细胞叶子的比例为90％。

7.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S3中，采用高浓度的抗生素筛选融合基因，有利于筛选到融合基因表达更高的细胞克隆。

8.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S3中，绿色荧光蛋白基因亮度的观测有利于筛选到该融合基因表达更高的样品。

9.根据权利要求1所述的一种高精度及高覆盖度的谱系树追踪方法，其特征在于：在步骤S4中，通过单细胞测序平台捕获具有融合基因的谱系条形码(5)的概率约为90％。