[发明专利]抗FGFR4的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了抗FGFR4的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用。本发明利用重组的FGFR4‑His蛋白免疫羊驼，得到了两个对人FGFR4蛋白具有高亲和力的抗FGFR4的纳米抗体，分别命名为FGFR4Nb1和FGFR4Nb2。在所得纳米抗体的基础上，本发明进一步利用基因工程技术，将所述纳米抗体表达于免疫细胞中，构建得到了表达抗FGFR4嵌合抗原受体的免疫细胞，所得免疫细胞对FGFR4阳性肿瘤细胞具有显著的杀伤作用，有利于FGFR4阳性肿瘤的治疗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及抗FGFR4的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

近年来，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor-T cells，CAR-T)虽在血液瘤治疗领域取得了巨大成果，但因实体瘤的微环境引起的T细胞浸润不足，以及肿瘤细胞下调肿瘤相关抗原等原因，导致CAR-T细胞在实体瘤治疗领域的效果不佳。此外，现虽已有大量关于CAR-T细胞治疗肝癌的研究，但主要集中在GPC3、MUC-1、CEA等，由于个体异质性，无法用于治疗癌细胞低表达上述靶点的患者。因此，需要优化肝癌的CAR-T细胞治疗，开发新的靶点。

成纤维细胞生长因子受体4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4，FGFR4)是FGFR家族的四个亚型中最保守的一个，拥有802个氨基酸，由三个免疫球蛋白样结构域(D1～D3)、一个单次跨膜结构域和一个具有酪氨酸激酶功能的胞内结构域组成。FGFR4是一种酪氨酸激酶受体，其可以选择性地结合细胞因子FGF19，并在FGFR4协同受体β-klotho(KLB)的协助下发挥调节胆汁、葡萄糖平衡的作用，但在疾病发生的情况下，FGFR4却与肿瘤的发生和发展相关，广泛表达于肝癌、胆管癌等多种实体瘤中。FGFR4-FGF19信号轴也被认为是肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)的驱动因素。FGF19-FGFR4通过调节GSK3β/β-catenin信号参与肿瘤细胞的上皮-间质转分化，其可以抑制肿瘤细胞的凋亡，促进肿瘤细胞的生存。因此，FGFR4是治疗具有异常FGF19-FGFR4信号的HCC患者的潜力靶点。

目前，CAR-T疗法多是基于人的单克隆抗体单链可变区(single chain antibodyfragment，scFv)对靶抗原进行特异性识别，但基于scFv的CAR-T疗法存在一些不足，如scFv的分子量较大，表达和稳定性方面存在缺陷等，需要提供分子量更小，亲和力更强的抗体。纳米抗体虽具有分子量小和亲和力强的优点，但现有关于抗FGFR4的纳米抗体的报道极少，如何获得可用于CAR-T疗法的抗FGFR4的纳米抗体和嵌合抗原受体也是需要技术人员克服的问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服目前缺少抗FGFR4的纳米抗体和相关嵌合抗原受体的不足，提供一种抗FGFR4的纳米抗体、嵌合抗原受体及其应用。

本发明的第一个目的是提供一种抗FGFR4的纳米抗体。

本发明的第二个目的是提供编码所述纳米抗体的核苷酸序列。

本发明的第三个目的是提供一种嵌合抗原受体。

本发明的第四个目的是提供一种载体。

本发明的第五个目的是提供一种重组慢病毒。

本发明的第六个目的是提供一种嵌合抗原受体免疫细胞。

本发明的第七个目的是提供一种药物组合物。

本发明的第八个目的是提供所述的纳米抗体、所述的核苷酸序列、所述的嵌合抗原受体、所述的重组表达载体、所述的重组慢病毒、所述的嵌合抗原受体免疫细胞或所述的药物组合物在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：