[发明专利]一种从卵黄抗体IgY中分离Fab和Fc片段的方法在审
| 申请号： | 202310542647.6 | 申请日： | 2023-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN116463389A | 公开（公告）日： | 2023-07-21 |
| 发明（设计）人： | 陈泽良;范首东;来永豪;张岩;张燚;焦洋 | 申请（专利权）人： | 东沃同泰（凤城）生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C07K16/02;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京恒律知识产权代理有限公司 11416 | 代理人： | 王术娜 |
| 地址： | 118100 辽宁省丹东市凤城市*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 卵黄 抗体 igy 分离 fab fc 片段 方法 | ||
1.一种从卵黄抗体IgY中分离Fab和Fc片段的方法，其特征在于，包括以下步骤：使用植物蛋白酶水解卵黄抗体IgY，利用45％饱和度的硫酸铵溶液处理酶解液，离心收集沉淀；
将所述沉淀溶解后加载到DEAE-Sepharose离子交换柱上，利用10mM Tris-HCl缓冲液洗脱Fab部分；再用含有0.21MNaCl的10mMTris-HCl缓冲液洗脱与DEAESepharose结合的Fc部分。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述植物蛋白酶包括木瓜蛋白酶和/或菠萝蛋白酶。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述水解的温度为37℃，时间为5h。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述植物蛋白酶和卵黄抗体IgY的质量比为0.2:5。
5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述水解时，将植物蛋白酶的溶液与卵黄抗体IgY的溶液混合；
其中植物蛋白酶的溶液的制备方法包括：将木瓜蛋白酶粉末溶解在含有20mM乙二胺四乙酸二钠盐的0.1M的PBS中，并与终浓度为100mM的半胱氨酸混合，37℃孵育3小时，得植物蛋白酶的溶液；
所述卵黄抗体IgY的溶液以0.1M的PBS为溶剂。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在所述水解后，于冰上将酶解液与60mM碘乙酰胺混合，以终止反应。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，在所述洗脱时，设置流速为1mg/mL。
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