[发明专利]一种多重荧光定量PCR检测试剂盒及应用

权利要求书

1.一种多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于所述多重荧光定量PCR检测试剂盒中的反应液中含有以下引物和探针：

PRRSV-F：5’-TTATTCTCCGGGTGATTGGG-3’，

PRRSV-R：5’-CTACACTCTGGCGAGTCAAACT-3’，

P1：JOE-TGCCTCTTTTTATGTTACAGTTACCCAGCCTTTG-BHQ1，

P2：FAM-TGCCTCTTTCTATGTTACAGTTACCCATTCTTCG-BHQ1，

P3：Cy5-TGCCTCTTTCTGTGTTACAGTTATCCTGCGTTTG-BHQ3，

P4：ROX-TGCCTCTTTCTGTGTTACAGCTACCCATTCTTTG-BHQ2。

2.根据权利要求1所述的多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于所述多重荧光定量PCR检测试剂盒中的反应液中还含有2×TaqMan mix。

3.根据权利要求1所述的多重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于所述多重荧光定量PCR检测试剂盒中的反应液中含有2×TaqMan mix 10 μL、10 μM的PRRSV-F 1 μL、10 μM的PRRSV-R 1 μL、5 μM的P1 0.8 μL、5 μM的P2 1 μL、5 μM的P3 1 μL、5 μM的P4 0.8 μL。

4.一种权利要求1-3中任一项所述的多重荧光定量PCR检测试剂盒在检测猪繁殖与呼吸综合征病毒中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于反应液置于对应的荧光定量PCR仪中，PCR反应条件为：95℃，3 min；95℃，10 s，63℃ 35 s，40个循环。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述猪繁殖与呼吸综合征病毒为经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株或NJ-1106R疫苗毒株。

7.根据权利要求4或6所述的应用，其特征在于

如果出现P1的荧光定量扩增曲线，且Ct值≤35，则待检样品含有经典毒株；

如果出现P2的荧光定量扩增曲线，且Ct值≤35，则待检样品含有高致病性毒株；

如果出现P3的荧光定量扩增曲线，且Ct值≤35，则待检样品含有类NADC30毒株；

如果出现P4的荧光定量扩增曲线，且Ct值≤35，则待检样品含有NJ-1106R疫苗毒株。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于

若检测样品的35Ct≤40，加大上样量后重复试验，若满足Ct值≤40，则根据权利要求7所述的内容进行判断，若Ct值40或不显示，则样品不含经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株或NJ-1106R疫苗毒株。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于多重荧光定量PCR检测试剂盒对经典毒株、高致病性毒株、类NADC30毒株和NJ-1106R疫苗毒株的检测灵敏度均为10²拷贝/μL。