[发明专利]一种粘度检测方法及其应用

说明书

本发明提供一种粘度检测方法及其应用，所述粘度检测方法使用荧光探针AH。所述粘度检测方法检测精度高，且不受环境pH影响，使用的荧光探针选择性好，具有良好的生物相容性，可以应用于线粒体的检测。

技术领域

本发明属于粘度检测领域，涉及一种粘度检测方法及其应用。

背景技术

粘度作为影响细胞内微环境的主要因素之一。糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、肿瘤等疾病的发生通常与细胞内黏度的异常变化相关。在细胞内不同部位粘度也不尽相同，线粒体能够调节能量代谢，在各种细胞活动中起关键作用，线粒体的粘度水平与细胞分化、信息传递和细胞凋亡等功能有很大关系。因此检测线粒体中粘度变化具有重要意义。

传统的粘度检测方法包括落球粘度计、毛细管粘度计、旋转粘度计等，这些传统方法适用于体外粘度检测，但是均无法对细胞内粘度进行测量。荧光探针由于其灵敏度高、毒性低、生物相容性好以及操作简单等优点，被认为是检测细胞内粘度的有力工具。近年来随着荧光探针的发展，用于检测线粒体、溶酶体等亚细胞器的粘度探针也越来越多，其中基于扭转分子内电荷转移(TICT)构建粘度探针备受关注；但是，粘度探针在发射波长短、分子结构复杂、斯托克斯位移小、生物体自发荧光干扰、近红外荧光成像等方面仍需要改进。因此，进一步开发基于TICT机制的靶向线粒体的新型粘度荧光探针是非常必要的。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种粘度检测方法，所述粘度检测方法检测精度高，且不受环境pH影响，使用的荧光探针选择性好，具有良好的生物相容性，可以应用于线粒体的检测。

为达到上述技术效果，本发明采用以下技术方案：

本发明目的之一在于提供一种粘度检测方法，其特征在于，所述粘度检测方法使用式1所示的荧光探针。

作为本发明优选的技术方案，所述粘度检测方法包括将所述荧光探针加入到被测体系中，通过对所述荧光探针的荧光强度进行检测，对所述被测体系的粘度进行定性或定量检测。

作为本发明优选的技术方案，所述定性检测的方法包括：采用标准体系，向所述标准体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；增加以及降低所述标准体系的粘度，并分别进行荧光强度检测；确定标准体系的粘度变化与荧光强度的变化趋势关系。

作为本发明优选的技术方案，所述定量检测的方法包括：向不同粘度的标准体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；对标准体系的粘度以及对应的荧光强度进行拟合，得到粘度与荧光强度的对应关系；向被测体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测，将所述荧光强度值带入所述粘度与荧光强度的对应关系中，得到所述被测体系的粘度。

作为本发明优选的技术方案，所述荧光探针的制备方法包括：

(1)将4-甲基吡啶与碘甲烷以及溶剂混合，在保护气氛下回流反应得到1,4-二甲基吡啶碘盐；

(2)将所述中间体与4-二甲基氨基肉桂醛、催化剂以及溶剂混合，在保护气氛下回流反应，纯化后得到所述荧光探针。

作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述回流反应的时间为12～36h，如15h、18h、21h、24h、27h、30h或33h等。

作为本发明优选的技术方案，所述催化剂包括乙酸铵。

优选地，步骤(2)所述回流反应的时间为10～30h，如12h、15h、18h、20h、22h、25h或28h等。

本发明目的之二在于提供一种上述任一种粘度检测方法的应用，所述检测方法用于检测细胞线粒体粘度。

作为本发明优选的技术方案，所述荧光探针与线粒体靶向结合。