[发明专利]一种具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述siRNA超分子微囊包括质量组分如下：脂质0.2-2.5份，胆甾醇0.05-0.25份，离子液体0-2.0份，戊二醇0-5.0份，阳离子0.0003-0.0084份，siRNA

0.0003-0.003份，其余为DEPC水。

2.如权利要求1所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述脂质为大豆卵磷脂PC90、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)其中至少一种。

3.如权利要求1所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述离子液体为苦参碱椰子油、苦参碱水杨酸、胆碱壬二酸、胆碱水杨酸其中至少一种。

4.如权利要求1所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述阳离子为双十八烷基二甲基氯化铵(DDAC)或聚乙烯亚胺(PEI，支链型，分子量10kDa)其中一种或两种复配，一种情况下，DDAC含量0.0006-0.006份，或PEI含量0.00084-0.0084份；两种复配情况下各降低一半含量，即DDAC含量0.0003-0.003份，同时PEI含量为0.00042-0.0042份。

5.如权利要求1所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述DEPC水为碳酸二甲酯含量0.1％，加入蒸馏水搅拌过夜，并于121℃灭菌15min处理后获得，或用灭菌的超纯水代替。

6.如权利要求1所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述siRNA为正义链5’端紧邻两个位置及3’端除TT外三个紧邻位置的磷酸骨架，和反义链’3端除TT外两紧邻位置的磷酸骨架进行特定修饰的siRNA。

7.如权利要求6所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊，其特征在于，所述特定修饰为硫代磷酸修饰siRNA/p-MITF，为可视化观察在硫代磷酸修饰基础上，对正义链5’端进行fam标记siRNA/p/fam-MITF。

8.一种具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法，其特征在于，所述siRNA超分子微囊的制备方法包括高压均质法和薄膜蒸发法。

9.如权利要求8所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法，其特征在于，所述siRNA超分子微囊的制备方法的高压均质法如下步骤：

(a1)按比例称取脂质、胆甾醇、戊二醇、阳离子混合后加热60-80℃溶解；

(a2)按比例称量离子液体，加入DEPC水，用氢氧化钠或柠檬酸调节pH6.0-9.0范围，加热至相同温度；

(a3)搅拌状态下将(a1)加入(a2)中，停止加热并于室温下继续搅拌5-10min，直到温度降至30℃以下；

(a4)步骤(a3)的样品经过高压均质，压力设置400-800bar，循环均质4-8次，冷却至室温后用0.45μm滤膜过滤3次，得到空白超分子微囊溶液；

(a5)步骤(a4)中空白阳离子微囊溶液在冰水浴中冷却至室温，加入相应量的siRNA，孵育15min，得到siRNA超分子微囊，密封冷藏于4℃条件下。

10.如权利要求8所述的具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法，其特征在于，所述siRNA超分子微囊制备方法的薄膜蒸发法步骤如下：

(b1)按比例称取脂质、胆甾醇、阳离子混合后用氯仿溶解；

(b2)45℃减压旋蒸直到形成半透明薄膜，真空干燥箱45℃处理12h；

(b3)加入DEPC水化处理30min，然后放入超声设备，以超声3s停3s的方式处理10min，即得空白微囊；

(b4)加入DEPC水稀释的siRNA溶液室温孵育30min；

(b5)0.45μm微孔膜过滤3次即可。