[发明专利]一种具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法及其应用

说明书

本发明提供一种具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法及其应用，(1)超分子微囊包裹的硫代磷酸修饰的siRNA稳定性高；(2)超分子微囊两种制备方法高压均质法，薄膜蒸发法，其中高压均质法可以获得粒径更小，粒径分布更均匀；(3)siRNA超分子微囊相对游离siRNA具有更好的透皮促渗效果；所获得的超分子微囊可以在B16细胞中实现有效的转染，从而发挥对MITF的mRNA基因和蛋白表达有抑制作用，同时，对TYR、TRP1、TRP2蛋白表达有显著抑制作用，且在体外B16细胞中对黑色素合成具有明显抑制作用；此外，将制备的siRNA超分子微囊应用于美白精华、面膜液、乳液三种组合配方，具有良好的安全性和美白祛斑的人体功效。

技术领域

本发明涉及化妆品技术领域，特别涉及一种具有MITF基因沉默而抑制黑色素的具有美白功效的siRNA超分子微囊的制备方法及其应用。

背景技术

根据相关调研，2022年全球美白化妆品市场规模超650亿美元，且呈稳定增长趋势，有超过8成用户有美白需求，而国内的相关问卷表明有近7成用户有美白需求，美白产品关注度呈波浪式上升趋势，近3年来关注度增长超过80％，消费者美白需求愈发强烈。随着监管政策不断升级，美白市场再扩张的同时也带来了新的挑战与机遇，最新的法规对祛斑美白类护肤品的门槛越来越高，不仅对原料端提出相关的监管要求，也要求产品必须具备美白相关的人体功效才能进行相应的宣称，这对于规范化美白化妆品市场具有重要意义，收益广大消费者。而关于美白的相关活性成分再化妆品目录中的包括维生素C及其衍生物、烟酰胺、传明酸、凝血酸、水杨酸、曲酸、壬二酸、α-熊果苷、红没药醇、苯乙基间苯二酚(377)、4-丁基间苯二酚(577)、光果甘草根提取物、小构树根提取物、母菊花提取物等，这些物质的作用机理主要包括抑制黑色素生成、淡化已生成黑色素、阻断黑色素传递、加快黑色素代谢、隔离紫外线等，均是以非靶向性的方式发挥作用。为更好发挥美白功效，实现精准、多维度的美白，具有靶向的美白或其协同传统美白具有研究开发价值。

超分子概念1987年获得诺贝尔化学奖，它是指由两种或两种以上分子依靠分子间相互作用结合在一起，组成复杂的、有组织的聚集体。

离子液体是室温或室温附近温度下呈液态的自由离子构成的物质，具有熔点低，导电性良好，热稳定性好、蒸气压低，不易燃，溶解性好，以及促渗效果好等作用。

RNA干扰(RNAi)技术是转录后基因沉默技术，是将特异性同源双链RNA(dsRNA)导入到细胞内，抑制目的基因的表达，是一种高效的靶向技术。通常，所用的RNA为siRNA(小干扰RNA，结构长约21-23个核苷酸的双链RNA)。RNA干扰概念和机制正式于1998年被安德鲁法尔和克雷格梅洛发现，并于2006年获诺贝尔医学奖。基因沉默技术是用于治疗多种疾病的有前途的治疗工具，具有巨大的癌症治疗潜力，目前，RNA干扰技术已经成为开发新型的靶向药物重点发展方向之一。RNAi技术应用于护肤领域可以实现特异、靶向、高效的护肤，有望为护肤领域的发展提出新的解决方案。但是，siRNA技术要普及应用仍面临的难题包括脱靶问题，如因载体、体内降解、内涵体逃逸或其他原因导致无法精准与目标靶细胞发挥作用；不稳定性，即裸露的siRNA容易被环境中核酸酶降解；免疫反应，病毒作为siRNA载体可能引起免疫反应；透皮效果差，浓度梯度为驱动力，水溶性的siRNA渗透有限。

皮肤中黑色素细胞在内外界刺激(如，紫外线、饮食、压力、激素等)下，分泌的酪氨酸经酪氨酸酶氧化形成多巴，进一步氧化为多巴醌及之后的多巴色素，最后在相应的酶作用下形成黑色素，而黑色素使得皮肤变黑，还需要再转运到角质层细胞。要将RNA干扰技术应用到护肤美白领域，关键点是降低或抑制黑色素合成过程中所需酪氨酸酶(TYR)或酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)的表达或活性，或者抑制黑素小体的成熟或转运过程，或者通过抑制MITF(小眼畸形相关转录因子)，从而间接调控其下游酪氨酸酶或相关蛋白的表达，实现黑色素的抑制作用，起到美白作用。通过离子液体和脂质等形成超分子微囊包载siRNA有望为具有特定靶向作用的siRNA应用于护肤化妆品提供新的解决思路和方案。

发明内容