[发明专利]用于幽门螺杆菌及毒力基因检测的CrRNA、CRISPR-Cas12a系统及应用在审
| 申请号： | 202310572212.6 | 申请日： | 2023-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN116574823A | 公开（公告）日： | 2023-08-11 |
| 发明（设计）人： | 沈继录;朱毅;徐华铭;唐浩;周静;刘润德 | 申请（专利权）人： | 安徽省公共卫生临床中心（安徽省传染病医院） |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/113;C12R1/01 |
| 代理公司： | 合肥兴东知识产权代理有限公司 34148 | 代理人： | 苗娟 |
| 地址： | 230012 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 幽门 螺杆 毒力 基因 检测 crrna crispr cas12a 系统 应用 | ||
1.一种用于幽门螺杆菌及毒力基因检测的CrRNA，其特征在于，包括三种CrRNA，其碱基序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的用于幽门螺杆菌及毒力基因检测的CrRNA，其特征在于，碱基序列如所述SEQ ID NO.1所示的CrRNA用于针对幽门螺杆菌16SrDNA；碱基序列如SEQ IDNO.2所示的CrRNA用于针对cagA基因；碱基序列如SEQ ID NO.3所示的CrRNA用于针对vacA基因。
3.根据权利要求1所述的用于幽门螺杆菌及毒力基因检测的CrRNA，其特征在于，所述三种CrRNA用于分别识别并结合到经RPA扩增的样本序列，并激活Cas12a蛋白切割靶序列，同时切割对应反应体系内的任一单链DNA。
4.一种如权利要求1～3任一所述的CrRNA在制备幽门螺杆菌及毒力基因检测产品中的应用。
5.一种检测幽门螺杆菌及毒力基因的CRISPR-Cas12a系统，其特征在于，包括如权利要求1～3任一所述crRNA。
6.根据权利要求5所述的检测幽门螺杆菌及毒力基因的CRISPR-Cas12a系统，其特征在于，具体包括Cas12a蛋白、crRNA、荧光素-猝灭剂双标记探针、RPA扩增产物，或者，包括Cas12a蛋白、crRNA、荧光素-生物素双标记探针、RPA扩增产物；其中，所述RPA扩增产物的扩增引物包括引物对1、引物对2和引物对3；所述引物对1用于针对幽门螺杆菌16S rDNA，包括如SEQ ID NO.4所示的引物F1以及如SEQ ID NO.5所示的引物R1；所述引物对2用于针对cagA基因，包括如SEQ ID NO.6所示的引物F2以及如SEQ ID NO.7所示的引物R2；所述引物对3用于针对vacA基因，包括如SEQ ID NO.8所示的引物F3以及如SEQ ID NO.9所示的引物R3。
7.根据权利要求5所述的检测幽门螺杆菌及毒力基因的CRISPR-Cas12a系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas12a系统还包括RPA扩增体系和Cas12a裂解反应体系所需试剂。
8.一种基于CRISPR-Cas12a快速检测幽门螺杆菌及毒力基因的方法，其特征在于，利用如权利要求5～7任一所述的检测幽门螺杆菌及毒力基因的CRISPR-Cas12a系统对待测样品进行检测。
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