[发明专利]一种同时检测CyHV-2和CyHV-3的双重TaqMan荧光定量PCR引物和探针组及应用

权利要求书

1.一种用于同时检测鲤疱疹病毒2型和3型的双重TaqMan荧光定量PCR引物和探针组，其特征在于，其由CyHV-2的上游引物CyHV-2-F、下游引物CyHV-2-R和探针CyHV-2-P以及CyHV-3的上游引物CyHV-3-F、下游引物CyHV-3-R和探针CyHV-3-P组成，所述CyHV-2-F、CyHV-2-R、CyHV-2-P、CyHV-3-F、CyHV-3-R、CyHV-3-P的核苷酸序列及修饰依次如下所示：

CyHV-2-F：CACCACCATCACCACCTAGTA；

CyHV-2-R：TCATCATCATCATCATCGGACTCT；

CyHV-2-P：FAM-ACCTGTGGTAGCGCCAGACCT-BHQ1；

CyHV-3-F：GCTATGCTGGAACTGGTGAT；

CyHV-3-R：CCTTGGACTCTTCGGTGTAG；

CyHV-3-P：VIC-CTGTAGGACAGACGCTCCAGCCGC-BHQ1。

2.一种用于同时检测鲤疱疹病毒2型和3型的双重TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，其含有权利要求1所述的引物和探针组。

3.权利要求1所述的PCR引物和探针组在制备用于同时检测鲤疱疹病毒2型和3型病毒的制剂中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述检测包括：

（1）提取待测样品DNA；

（2）以所述DNA为模板，使用权利要求1所述的引物和探针组进行双重TaqMan荧光定量PCR检测；

双重TaqMan荧光定量PCR反应体系如下：

Entrans 2X qPCR Probe Mater Mix 10μL；

CyHV-2-F：0.6μl，终浓度10 μmol/L；

CyHV-2-R：0.6μl，终浓度10 μmol/L；

CyHV-2-P：0.6μl，终浓度10 uM/L；

CyHV-3-F：1.0μl，终浓度10 μmol/L；

CyHV-3-R：1.0μl，终浓度10 μmol/L；

CyHV-3-P：0.6μl，终浓度10 uM/L；

模板DNA 2μl，加入ddH₂O将体系补足至20μl；

双重TaqMan荧光定量PCR反应条件为：95℃预变性10min；循环反应包括95℃ 15s，60℃30s，共设置40个循环。