[发明专利]一种基于Fe-N-C SACs和适配体的新型便捷比色的啶虫脒生物检测方法

权利要求书

1.一种基于Fe-N-C SACs和适配体的新型便捷比色的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，包括以下步骤进行：

S1、铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs的合成：

将氯化亚铁和1,10-邻菲罗啉溶解在有机溶剂中，后加入多孔碳超声震荡，高温搅拌至有机溶剂挥发，烘干；加入三聚氰胺研磨，煅烧后得铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs；

S2、啶虫脒适配体/铁单原子纳米酶反应体系的构建：

先将不同浓度的标准啶虫脒溶液与巯基修饰的适配体母液混合孵育，然后加入铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液反应，制得ACE aptamer/Fe-N-C SACs反应体系；

或，将巯基修饰的适配体母液与铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液混合反应，再加入不同浓度的标准啶虫脒溶液进行孵育，制得ACE aptamer/Fe-N-C SACs反应体系；

S3、啶虫脒的标准曲线绘制：

在步骤S2所得反应体系中加入TMB溶液，再调节pH，反应后记录UV-Vis吸光度，根据吸光度、不同浓度的标准啶虫脒溶液线性拟出标准曲线；

S4、啶虫脒浓度的测定：

S4-1、按照步骤S2的方法构建反应体系

取待测浓度的啶虫脒溶液与巯基修饰的适配体混合孵育，然后加入铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液反应；

或，将巯基修饰的适配体与铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液混合反应，再加待测浓度的标准啶虫脒溶液进行孵育；

S4-2、按照步骤S3的方法测试浓度

在所得反应体系中加入TMB溶液，再调节pH，反应后用TMB终止显色液终止反应，并记录UV-Vis吸光度；

将测得的吸光度代入步骤S3所得标准曲线中，即测得啶虫脒溶液的浓度。

2.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S1中，多孔碳是通过如下方法制备而得：加热柠檬酸钾，将得到的黑色粉末浸泡在硫酸溶液中，搅拌过滤，将得到的多孔碳粉干燥后收集，得多孔碳。

3.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S1中，氯化亚铁、1,10-邻菲罗啉、多孔碳的用量比为0.5-07mmoL：2.5-3.5mmoL：250-350mg。

4.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述煅烧的温度为650-750℃，煅烧时间为0.5-1.5h。

5.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S2中，不同浓度的啶虫脒为200-1200nM。

6.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，巯基修饰的适配体母液、铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs用量体积比为140-196：40-60；巯基修饰的适配体母液的浓度为8-12μM；铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液的浓度为0.4-0.9mg/ml。

7.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S2中，巯基修饰的适配体是通过在适配体5’末端核苷酸上化学修饰巯基得到，所述适配体序列为SEQ ID NO.1。

8.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述孵育温度为15-60℃，时间为15-25min；反应时间为10-15min。

9.根据权利要求1所述的啶虫脒生物检测方法，其特征在于，步骤S3中，TMB溶液的浓度为0.05-0.15mM，TMB溶液与反应体系的体积比为20-30：65-75。

10.一种SH-APT抑制Fe-N-C SACs-TMB比色纳米生物传感器，其特征在于，通过如下方法制备得到：将氯化亚铁和1,10-邻菲罗啉溶解在有机溶剂中，后加入多孔碳超声震荡，高温搅拌至有机溶剂挥发，烘干；加入三聚氰胺研磨，煅烧后得铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs；将巯基修饰的适配体母液与铁单原子纳米酶Fe-N-C SACs溶液混合反应，即得所述SH-APT抑制Fe-N-C SACs-TMB比色纳米生物传感器。