[发明专利]一种鉴定或辅助鉴定水牛角药材的引物对及DNA条形码、方法和应用

权利要求书

1.一种水牛角的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码的核苷酸序列选自SEQ IDNO1 Bubalus Bubalis。

2.一种牛角的DNA条形码组合，其特征在于，所述DNA条形码组合的核苷酸序列包括用于检测水牛角的SEQ ID NO1 Bubalus Bubalis、用于检测牦牛角的SEQ ID NO2 Bosgrunniens和用于检测黄牛角的SEQ ID NO3 Bos taurus。

3.权利要求1所述的DNA条形码或权利要求2所述的DNA条形码组合的引物对，其特征在于，所述引物对序列：

正向引物NJ324-F：5’-GGAGAAGCCCCGGCAGAATT-3’

反向引物NJ324-R：5’-GCGTGTGCGGTTACAACTACGTT-3’。

4.一种牛角种类的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品消毒，研磨成粉，再提取牛角样品的DNA；

(2)以上一步所得的DNA为模板，与权利要求2所述的引物对进行PCR反应扩增产物；PCR反应结束后取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统观察、成像；

(3)若上一步所得产物在250bp-500bp间有单一明亮条带，则将剩余PCR产物进行双向测序，并比对正向与反向序列，去除引物区，得到测序结果。

(4)将(3)所得测序结果与DNA条形码进行比对，鉴别样品是否为水牛角、牦牛角、黄牛角。

5.根据权利要求4所述的牛角种类的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR反应的反应体系包括：10×PCR Buffer、dNTP Mixture、正向引物、反向引物、rTaq酶、DNA模板，无菌双蒸水。

6.根据权利要求4所述的牛角种类的鉴别方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR反应的反应程序为90-98℃变性25-35s，58-63℃退火25-35s，70-75℃延伸25-35s，重复共30-40个循环，70-75℃终延伸3-8min。

7.根据权利要求4所述的牛角种类的鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中将有明亮单一条带的样品进行测序，测序引物与PCR引物一致，前后去除引物区，得到测序结果。

8.根据权利要求4所述的牛角种类的鉴别方法，其特征在于，步骤(3)中单一明亮条带在310-340bp处。

9.权利要求1所述的水牛角的DNA条形码或权利要求2所述的牛角的DNA条形码组合或权利要求3所述的引物对在鉴别水牛角、牦牛角或黄牛角中的应用。

10.权利要求1所述的水牛角的DNA条形码或权利要求2所述的牛角的DNA条形码组合或权利要求3所述的引物对在制备检测水牛角、牦牛角或黄牛角的试剂或试剂盒中的应用。