[发明专利]一种病毒样颗粒及其制备方法和制备的疟疾传播阻断疫苗

权利要求书

1.一种病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将AP205外壳蛋白基因序列N端与SpyTag肽连接，C端与PSOP25基因序列连接，得到序列1；

(2)将序列1的N端与C端连接，得到SpyTag-AP205-PSOP25；

(3)将Pv22基因序列的N端与融合标签连接，C端与编码Spycatcher中第24～139氨基酸基因序列连接，得到序列2；

(4)将序列2的N端与C端连接，得到Pv22-Spycatcher；

(5)在SpyTag-AP205-PSOP25的两端引入BamHI和NotI酶切位点，构建SpyTag-AP205-PSOP25-pET20b(+)表达载体；

(6)在Pv22-Spycatcher的两端引入EcorI和NotI酶切位点，构建Pv22-Spycatcher-pET-32a(+)表达载体；

(7)将SpyTag-AP205-PSOP25-pET20b(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，培养得到SpyTag-AP205-PSOP25蛋白；

(8)将Pv22-Spycatcher-pET-32a(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，培养得到Pv22-Spycatcher蛋白；

(9)将SpyTag-AP205-PSOP25蛋白和Pv22-Spycatcher蛋白混合，自组装后得到病毒样颗粒。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述AP205外壳蛋白基因序列如SEQ ID NO.1所示，所述SpyTag肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述PSOP25基因序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述Pv22基因序列如SEQID NO.4所示，所述融合标签为6个组氨酸残基组成的融合标签，编码Spycatcher中第24～139氨基酸基因序列如SEQ ID NO.5所示。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)～(4)中所述连接时采用柔性Linker进行连接，所述柔性Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)中所述培养的方法为：将SpyTag-AP205-PSOP25-pET20b(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞后，在35～39℃条件下培养至菌液OD600值为0.4～0.6，加入0.8～1.2mMIPTG，在18～22℃条件下诱导14～18h。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(8)中所述培养的方法为：将Pv22-Spycatcher-pET-32a(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞后，用0.8～1.2mMIPTG，在17～21℃条件下诱导6～10h。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(9)中所述SpyTag-AP205-PSOP25蛋白和Pv22-Spycatcher蛋白的摩尔比为1：2.5～3.5，所述自组装的环境为pH＝7.0～7.4的含有0.18～0.22％聚山梨酯80的磷酸盐缓冲液，所述自组装的温度为2～6℃，自组装的时间为8～12h。

8.一种权利要求1～7任意一项所述方法制备的病毒样颗粒。

9.权利要求8所述病毒样颗粒在制备疟疾传播阻断疫苗中的应用。

10.一种含有权利要求8所述病毒样颗粒的疟疾传播阻断疫苗。