[发明专利]一种病毒样颗粒及其制备方法和制备的疟疾传播阻断疫苗

说明书

本发明涉及疟疾疫苗技术领域。本发明提供了一种病毒样颗粒及其制备方法和制备的疟疾传播阻断疫苗，所述病毒样颗粒的制备方法包括如下步骤：将AP205外壳蛋白基因序列、SpyTag肽和PSOP25基因序列连接，得到SpyTag‑AP205‑PSOP25；将Pv22基因序列、融合标签连接和与编码Spycatcher中第24～139氨基酸基因序列连接，得到Pv22‑Spycatcher；分别构建表达载体并转化到大肠杆菌感受态细胞中，分别培养后得到蛋白，将蛋白自组装后得到病毒样颗粒。本发明提供的病毒样颗粒具有高度的免疫原性，可直接引流至淋巴结，对于抗原呈递细胞的摄取和交叉呈递可达到最佳效果。

技术领域

本发明涉及疟疾疫苗技术领域，尤其涉及一种病毒样颗粒及其制备方法和制备的疟疾传播阻断疫苗。

背景技术

疟疾以其高传染性和较高的死亡率威胁人类健康，而在疟原虫的生命周期中，易感蚊子摄入人体内血液形成的配子体后，其红细胞中的配子体细胞在适应条件下将被激活，完全分化后的配子具有需要寄生虫溶两层膜并在中肠中被排出，并发育为成熟配子。随后，通过受精结合形成合子，合子可分化为便于活动的动合子，动合子穿越蚊子中肠壁后形成卵囊。其中动合子表面蛋白及储存在其顶端细胞器的蛋白可与疟原虫-宿主之间相互作用，从而导致宿主感染疾病。因此，针对这一过程，传播阻断疫苗可以从源头上高效、快速的阻断疟原虫的传播，其作为目前疫苗研发较为新颖、前沿的技术，具有广阔的研发空间和推广应用潜力。

自2013年以来，传播阻断疫苗作为疟疾疫苗的一大研究热点，被广泛关注。其中，抗原的选择是该疫苗的研发过程中的关键，随着基因检测，单细胞测序等技术的进步，越来越多等候选抗原被发现。而目前研究主要以Pvs25、Pvs230、Pvs48/45三种候选抗原为主，且均已进入临床测试阶段，但经过多次实验证明，其抗体水平下降迅速、功能的免疫原性和耐久性不佳，因此仍需进一步优化传播阻断疫苗技术，以提升整体保护性及安全性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种病毒样颗粒及其制备方法和制备的疟疾传播阻断疫苗，实现多阶段抑制疟原虫有性生殖，大幅提升疫苗传播阻断效果。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种病毒样颗粒的制备方法，包括如下步骤：

(1)将AP205外壳蛋白基因序列N端与SpyTag肽连接，C端与PSOP25基因序列连接，得到序列1；

(2)将序列1的N端与C端连接，得到SpyTag-AP205-PSOP25；

(3)将Pv22基因序列的N端与融合标签连接，C端与编码Spycatcher中第24～139氨基酸基因序列连接，得到序列2；

(4)将序列2的N端与C端连接，得到Pv22-Spycatcher；

(5)在SpyTag-AP205-PSOP25的两端引入BamHI和NotI酶切位点，构建SpyTag-AP205-PSOP25-pET20b(+)表达载体；

(6)在Pv22-Spycatcher的两端引入EcorI和NotI酶切位点，构建Pv22-Spycatcher-pET-32a(+)表达载体；

(7)将SpyTag-AP205-PSOP25-pET20b(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，培养得到SpyTag-AP205-PSOP25蛋白；

(8)将Pv22-Spycatcher-pET-32a(+)表达载体转化到大肠杆菌感受态细胞中，培养得到Pv22-Spycatcher蛋白；

(9)将SpyTag-AP205-PSOP25蛋白和Pv22-Spycatcher蛋白混合，自组装后得到病毒样颗粒。