[发明专利]一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶及构建方法

权利要求书

1.一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，包括由TdT经切割得到的两个TdT蛋白结构域，所述两个TdT蛋白结构域分别记为TdT-D1和TdT-D2，当所述TdT-D1和TdT-D2分别单独存在时不独立表现出TdT催化活性；当所述TdT-D1和TdT-D2同时存在且靠近时，TdT-D1和TdT-D2会发生重组并表现出TdT催化活性。

2.根据权利要求1所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述TdT-D1的N端连接有pMag，记为pMag-TdT-D1；所述TdT-D2的C端连接有nMag，记为TdT-D2-nMag；

在蓝光照射前，所述pMag-TdT-D1和TdT-D2-nMag单独存在时不独立表现出TdT催化活性；

在蓝光照射下，pMag和nMag会二聚并使所述TdT-D1和TdT-D2靠近，TdT-D1和TdT-D2会发生重组并表现出TdT催化活性。

3.根据权利要求2所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述pMag-TdT-D1和TdT-D2-nMag的摩尔比为1:1。

4.根据权利要求2所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述TdT-D1的N端通过第一连接子连接pMag，所述TdT-D2的C端通过第一连接子连接nMag，所述第一连接子的氨基酸序列为GSGGSGGSGGSG。

5.根据权利要求1所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述由TdT经切割得到的两个TdT蛋白结构域具体包括：TdT删除了没有实质催化功能的1-146氨基酸之后，剩余TdT经切割得到的两个TdT蛋白结构域；

其中，所述TdT的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述TdT删除了没有实质催化功能的1-146氨基酸之后，剩余TdT的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

6.根据权利要求1所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述TdT-D1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述TdT-D2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

7.根据权利要求3所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶，其特征在于，所述pMag-TdT-D1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述TdT-D2-nMag的氨基酸序列如SEQID NO.6所示。

8.一对权利要求1所述的可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶的构建方法，其特征在于，包括步骤：

提供TdT；

用第二连接子将所述TdT的N端和C端连接起来，在TdT上从N端开始逐段选择切割位点，构建出不同TdT变体形式；

从不同TdT变体形式中筛选出高表达水平和高催化活性的TdT变体，得到候选TdT变体；

将所述候选TdT变体中的第二连接子去除，得到所述TdT-D1和TdT-D2，且当所述TdT-D1和TdT-D2分别单独存在时不独立表现出TdT催化活性；当所述TdT-D1和TdT-D2同时存在且靠近时，TdT-D1和TdT-D2会发生重组并表现出TdT催化活性。

9.根据权利要求8所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶的构建方法，其特征在于，所述第二连接子的氨基酸序列为GTGGSGGTGG；

得到所述TdT-D1、TdT-D2后，还包括步骤：将光响应蛋白元件pMag和光响应蛋白元件nMag分别连接到TdT-D1的N端和TdT-D2的C端上，得到pMag-TdT-D1和TdT-D2-nMag。

10.权利要求1-7任一项所述的一对可分裂重组的末端脱氧核苷酸核酸转移酶催化DNA合成反应的应用。