[发明专利]耐中性环境的海因酶突变体及其应用在审
| 申请号： | 202310628657.1 | 申请日： | 2023-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN116590269A | 公开（公告）日： | 2023-08-15 |
| 发明（设计）人： | 王金刚;韦炎龙;梁岩;任亮 | 申请（专利权）人： | 上海邦林生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/86 | 分类号： | C12N9/86;C12N15/55;C12P13/04;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 201403 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 中性 环境 海因 突变体 及其 应用 | ||
1.一种海因酶突变体，其特征在于，其为野生海因酶氨基酸序列SEQ ID NO:1中发生下述五个以上位点突变所形成的突变体：Q25L、D45T、D45A、T69A、H124N、L310P、G354R、L394I、P399S，该海因酶突变体具有在pH7.5以下环境中催化D-对羟基苯海因水解为N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸的功能。
2.如权利要求1所述的海因酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID NO:3，是野生海因酶氨基酸序列SEQ ID NO:1中发生下述六个位点突变所形成的突变体：Q25L、D45T、H124N、G354R、L394I、P399S。
3.编码如权利要求1或2所述海因酶突变体的基因。
4.如权利要求3所述的基因，其特征在于，编码海因酶突变体氨基酸序列SEQ ID NO:3的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。
5.如权利要求1或2所述的海因酶突变体在制备N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸和/或D-对羟基苯甘氨酸中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，当所述海因酶突变体用于制备D-对羟基苯甘氨酸时，与氨基酸序列为SEQ ID NO:5的氨甲酰水解酶组合使用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述海因酶突变体和所述氨甲酰水解酶在微生物中共表达。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，反应体系中以D-对羟基苯海因为底物原料，用所述海因酶突变体和所述氨甲酰水解酶或者它们的表达微生物催化水解反应，得到N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的微生物是所述海因酶突变体和所述氨甲酰水解酶的共表达质粒的转化子。例如，所述的微生物选自枯草芽孢杆菌、毕赤酵母、酿酒酵母或者大肠杆菌，优选大肠杆菌BL21(DE3)。
10.一种共表达如权利要求2所述海因酶突变体和如权利要求6中所述氨甲酰水解酶的质粒。
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