[发明专利]一种β-葡萄糖苷酶、表达载体、宿主细胞和应用

权利要求书

1.一种β-葡萄糖苷酶，其对对硝基苯酚的比活力为854 U/mg。

2.根据权利要求1所述的β-葡萄糖苷酶，其基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.一种重组载体，其特征在于：含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

4.一种宿主细胞，其特征在于：含有权利要求1或2所述的β-葡萄糖苷酶；或者含有权利要求3所述的重组载体。

5.一种同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于：所述方法是利用权利要求1或2所述的β-葡萄糖苷酶基因或者权利要求3所述的重组载体或者权利要求4所述的宿主细胞实现的。

6.根据权利要求5所述的同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于，步骤为：

（1）构建含有β-葡萄糖苷酶基因的重组载体，转化至大肠杆菌中获得表达株；

（2）表达株经培养、IPTG诱导、发酵、超声破碎后离心取上清，得可溶性的β-葡萄糖苷酶，再经蛋白纯化得纯的β-葡萄糖苷酶；

（3）将淫羊藿药材和黄芩药材烘干、粉碎、回流提取后，合并滤液，浓缩干燥得混合提取物；

（4）将混合提取物加入步骤（2）的β-葡萄糖苷酶的水溶液中，经酶解反应后，加热过滤并收集滤液；

（5）向步骤（4）的滤液中加入乙酸乙酯进行萃取，获得宝藿苷I和黄芩素。

7.根据权利要求6所述的同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于：所述步骤（1）中β-葡萄糖苷酶基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

8.根据权利要求6所述的同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于：所述步骤（2）中IPTG的浓度为0.2 mM；蛋白纯化采用Ni-NTA亲和层析柱进行。

9.根据权利要求6所述的同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于：所述步骤（3）中回流提取采用含弱碱甲醇的有机溶剂。

10.根据权利要求6所述的同时制备宝藿苷I和黄芩素的方法，其特征在于：所述步骤（4）中酶解反应的pH为6.5，温度为45℃，β-葡萄糖苷酶的水溶液的质量浓度为55 g/L，混合提取物与β-葡萄糖苷酶的水溶液的固液比为1:8。