[发明专利]一种扩繁莱氏绿僵菌Mr006的方法及其应用

权利要求书

1.一种莱氏绿僵菌Mr006扩繁的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）莱氏绿僵菌Mr006孢子培养，获得孢子液；

（2）莱氏绿僵菌Mr006孢子扩繁，选择夜蛾科昆虫幼虫，用亚致死剂量氯虫苯甲酰胺酰胺处理，喷施孢子液，集中至无菌盒中，以人工饲料继续饲养至死亡或化蛹，观察虫体侵染情况，待第1次完全产孢后收集孢子，僵虫保湿后，继续扩繁培养再重复收取1-2次孢子，获得最大产孢量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述莱氏绿僵菌Mr006扩繁的方法步骤（1）中孢子培养的包括：配制莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基；培养基灭菌及接种；发酵培养获得孢子液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述莱氏绿僵菌Mr006扩繁的方法步骤（2）中所述夜蛾科昆虫为草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、棉铃虫；优选所述夜蛾科昆虫为斜纹夜蛾。

4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述培养基包括大米20份-60份；稻壳10份-20份；麦芽糖2份-4份；黄粉8份-16份；酵母粉2份-8份；水30份-60份；虫体冻干粉1份-2份；磷酸锌0.1份-0.2份；硫酸亚铁 0.05份-0.15份；所述虫体冻干粉为草地贪夜蛾虫体冻干粉。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述培养基包括大米40份、稻壳15份、麦芽糖3份、黄粉12份、酵母粉5份、水25份、草地贪夜蛾虫体冻干粉1.5份、磷酸锌0.15份、硫酸亚铁0.1份。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，发酵培养获得孢子液包括28℃光照培养箱培养，光照条件为16L/8D，光暗交替，培养3d后；调整温度为24℃，光照条件为23L/1D，光暗交替，继续培养，培养14d后，停止发酵，获得分生孢子粉，用吐温-80溶液将固体发酵培养基上收集的分生孢子洗下，配置成分生孢子液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，莱氏绿僵菌Mr006扩繁的方法步骤（2）中饲养条件为将虫体置于温度为27±1℃、相对湿度70±5%、光周期14L:10D的人工气候箱中饲养。

8.一种莱氏绿僵菌Mr006扩繁的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）

将莱氏绿僵菌Mr006喷施在用亚致死剂量氯虫苯甲酰胺酰胺（LC₂₅值0.008ug/g）处理过的斜纹夜蛾2龄期活幼虫上引发感染；（2）将感染莱氏绿僵菌Mr006孢子斜纹夜蛾2龄期幼虫集中至无菌盒中，置于温度为27±1℃、相对湿度70±5%、光周期14L:10D的人工气候箱，以人工饲料继续饲养至死亡或化蛹，观察虫体侵染情况，待第1次完全产孢后收集孢子，僵虫保湿后，继续扩繁培养再重复收取2次孢子，获得了最大产孢量。

9.一种夜蛾科昆虫的蛹期防治剂，其特征在于，所述防治剂含有莱氏绿僵菌Mr006扩繁孢子剩余的僵虫粉；优选的，所述僵虫粉为以斜纹夜蛾为试虫进行莱氏绿僵菌Mr006扩繁孢子剩余的僵虫粉碎制备得到的；优选的，所述夜蛾科昆虫为草地贪夜蛾。

10.莱氏绿僵菌Mr006扩繁孢子剩余的僵虫制备的僵虫粉在夜蛾科昆虫的蛹期防治剂中的应用。