[发明专利]一种具有抗氧化活性的微拟球藻多糖的制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种具有抗氧化活性的微拟球藻多糖的制备方法和应用，属于多糖制备技术领域，包括以下步骤：通过对微拟球藻进行超低温冻存，以保证使用的微拟球藻在最好的状态，使用超声辅助提取和酸提法对海藻多糖进行粗提，保护多糖结构完整的同时，再使用酶‑溶剂萃取法，对微拟球藻多糖粗提物进行纯化，去除蛋白质和多肽杂质，保护结构的同时增加产率。再使用三氧化硫‑吡啶法对微拟球藻多糖进行硫酸化修饰，增加多糖的抗氧化活性，随后通过环氧氯丙烷介导的交联硫酸化微拟球藻多糖与壳聚糖交联，使得硫酸化微拟球藻多糖负载在水凝胶体系上，具有更好的生物相容性、细胞相容性和血液相容性，这为微拟球藻多糖增加了在生物医学方面的应用范围。

技术领域

本发明属于多糖制备技术领域，具体地，涉及一种具有抗氧化活性的微拟球藻多糖的制备方法和应用。

背景技术

微拟球藻（Microcystis）是一种生活在海洋中的大型单细胞绿藻，其多糖是该藻主要的营养物质之一。其细胞壁主要由β-D-甘露糖和葡萄糖组成，另外还有半乳糖和木糖等多种胞外多糖，其细胞壁的平均长度约为20-30μm，厚度约为10-30μm。微拟球藻多糖具有多种生理活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等。

人们在收集海洋藻类后，由于主要养殖在富营养化淡水池塘和湖泊中，而非在海水中，导致培养的海洋微藻具有培养物损失和质量下降的问题，且饲养过程中没有生长检测系统和控制系统，所以待用的微藻菌株总是不能处于最佳状态，还造成了运行成本的增加。此外，在提取微藻多糖的过程中，高产率的提取方法往往损伤了多糖的部分结构，在使用溶剂萃取法对多糖类物质进行萃取时，溶剂对多糖结构的损害较低，但往往需要重复多次萃取过程才能够有较好的多糖产率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗氧化活性的微拟球藻多糖的制备方法和应用，通过对微拟球藻进行超低温冻存，以保证使用的微拟球藻在最好的状态，使用超声辅助提取和酸提法对海藻多糖进行粗提，保护多糖结构完整的同时，再使用酶-溶剂萃取法，对微拟球藻多糖粗提物进行纯化，去除蛋白质和多肽杂质，保护结构的同时增加产率。再使用三氧化硫-吡啶法对微拟球藻多糖进行硫酸化修饰，增加多糖的抗氧化活性，随后通过环氧氯丙烷介导的交联硫酸化微拟球藻多糖与壳聚糖交联，使得硫酸化微拟球藻多糖负载在水凝胶体系上，具有更好的生物相容性、细胞相容性和血液相容性，这为微拟球藻多糖增加了在生物医学方面的应用范围。本发明要解决的技术问题：

本发明解决了培养的海洋微藻具有培养物损失和质量下降的问题，待用的微藻菌株总是不能处于最佳状态，导致成本的增加和高产率的提取方法往往损伤了多糖的部分结构，而使用溶剂萃取法对多糖类物质进行萃取时，溶剂对多糖结构的损害较低，但往往需要重复多次萃取过程才能够有较好的多糖产率的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种具有抗氧化活性的微拟球藻多糖的制备方法，包括以下步骤：

（1）将冷冻保存的微拟球藻进行解冻，随后用无菌生理盐水进行稀释后接种到已灭菌的培养基中，进行摇床振荡培养，得到活化微拟球藻，具体步骤为：

将冷冻保存的微拟球藻置于7℃的血清水浴中，解冻90秒，随后将解冻后的微拟球藻接种在试管中，使用无菌去离子水将体系稀释至10倍体积，随后在室温下以3500rpm速率离心10分钟，过滤，使用F/2培养基对沉淀进行培养，光照强度4000Lux，光暗周期为12小时：12小时，取培养至稳定期，即得活化微拟球藻；

（2）对活化微拟球藻进行超声辅助提取和酸提法对活化微拟球藻进行多糖提取，得到微拟球藻多糖粗提物，具体步骤为：

A1、将活化微拟球藻在室温条件下以8000rpm速率离心10分钟，弃去上清液，使用蒸馏水洗涤3次后，以相同条件再次离心，将沉淀置于-80℃低温冷冻干燥2小时，随后研磨成粉末，过80目筛，得到微拟球藻粉末；