[发明专利]一种PDGF因子的纯化方法

权利要求书

1.一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述PDGF因子的纯化方法包括下述操作步骤：

S1、粗制P47溶液：

起始物料为采用固相合成方法获得的多肽-树脂，经过适宜的切割剂将多肽从树脂上切割并切除侧链保护基的粗肽，该粗肽经过乙醚洗涤并充分干燥，采用阴离子交换树脂进行粗提，溶解P47粗肽，使用平衡液A平衡离子交换树脂，上样进行吸附，使用平衡液B平衡并去除杂质，使用洗脱液洗脱获得粗制P47溶液；

S2、反相色谱柱纯化操作：

利用反相色谱对粗制P47溶液加以第一次纯化，且为防止固定相在高比例水相体系中固定相塌陷的状况，对色谱柱中的硅胶表面加以亲水化修饰，纯化后获得A型P47溶液；

S3、反相HPLC精制：

利用反相HPLC对A型P47溶液进行精制，以十八烷基硅胶为固定相，使用平衡液C平衡，将A型P47溶液上样，以醋酸乙腈水溶液作为流动相进行洗脱，收集主峰既得精制P47溶液；

S4、P47纯品获得：

去除精制P47溶液中的有机溶液，随后将其置于冷冻干燥机进行真空冷冻干燥得到干燥的P47纯品。

2.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S1步骤中，粗制P47溶液获得后置于4摄氏度的旋转机中高速旋转30min，随后取出旋转后的粗制P47溶液置于冰上，在打开超声波细胞破碎机，功率随产品种类进行设定，根据说明书进行操作，超声时间控制在4s，间隔为8S，10min后取出粗制P47溶液。

3.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S1步骤中，平衡液A采用碱性溶液，pH值为9.5-11.5，而平衡液B采用含盐碱性溶液，离子浓度为50-200mmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S1步骤中，洗脱液为酸性溶液，pH值为3.5-4.5。

5.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S2步骤中，亲水化修饰包括采用非封尾的短链烷基、在固定相中嵌入亲水或极性基团、在烷基与硅胶间插入极性基团、采用长链烷基以及采用大孔硅胶作为固相载体。

6.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S2步骤中，色谱柱在装柱前需要将空气用加压的方法将空气排干，以避免柱中有空气留存。

7.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S2步骤中，通过反相色谱可去除粗制P47溶液中的盐类杂质。

8.根据权利要求1所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：所述S3步骤中，醋酸乙腈水溶液作为流动相进行洗脱的洗脱方式为梯度洗脱，从0-180min的乙腈浓度(V/V)为5％-95％。

9.根据权利要求8所述的一种PDGF因子的纯化方法，其特征在于：具有同样效果的洗脱方案还包括分步洗脱，亦分为三个阶段，乙腈浓度(V/V)分别为：浓度1％-10％，时间5-50min、浓度11％-45％，时间5-50min、浓度46％-90％，时间10-100min。