[发明专利]一种PDGF因子的纯化方法

说明书

本发明公开了一种PDGF因子的纯化方法，涉及生物技术领域，所述PDGF因子的纯化方法包括下述操作步骤：S1、粗制P47溶液；S2、反相色谱柱纯化操作；S3、反相HPLC精制和S4、P47纯品获得。该PDGF因子的纯化方法，利用反相色谱柱纯化操作对粗制P47溶液加以第一次纯化，以去除粗制P47溶液中的盐类杂质，从而减少反相HPLC精制的操作次数，由此避免压强增高、盐成分对填料损伤较大等问题，且色谱柱中的硅胶表面加以亲水化修饰，通过采用非封尾的短链烷基、在固定相中嵌入亲水或极性基团、在烷基与硅胶间插入极性基团中的一种方式，可以使硅胶表面的亲水性更强，从而可以有效防止高比例水相体系中固定相塌陷的发生。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种PDGF因子的纯化方法。

背景技术

血小板衍生生长因子简称PDGF——血小板衍生生长因子受体简称PDGFR，信号传导通路(以下简称PDGF-PDGFR信号传导通路)的活跃表达与肝癌、胃癌、乳腺癌和肺癌等实体瘤的发生和发展具有一定的相关性，提示阻断PDGF-PDGFR信号传导通路将有助于肿瘤的治疗，用于肿瘤和纤维化疾病治疗的由47个氨基酸组成的多肽PDGFR抑制剂(以下简称P47)，现有采用固相合成的方法合成P47粗肽，在合成结束后将使用适宜的切割液对多肽-树脂进行切割以使粗肽与树脂分离并去除粗肽侧链上的保护基，经过洗涤、干燥后获得多肽含量在20％-70％的粗肽，而可用于临床的药用多肽，其含量通常应达到95％以上，为了提高多肽的纯度，有效去除空心肽、催化剂等杂质，本领域最常用的办法是使用适宜的溶剂例如醋酸水溶液、醋酸乙腈水溶液等进行溶解后，利用反相HPLC技术进行纯化。

现有的可用于临床的药用P47，其多肽含量通常应达到95％以上，因此需要利用反相HPLC技术进行提纯纯化，反相HPLC具有很高的分辨率，但是存在反复使用易使压强增高、盐成分对填料损伤较大等问题，因此需要引入新的方法对多肽进行预处理后再利用反相HPLC进行精制。

于是，有鉴于此，针对现有的结构及缺失予以研究改良，提出一种PDGF因子的纯化方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种PDGF因子的纯化方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种PDGF因子的纯化方法，所述PDGF因子的纯化方法包括下述操作步骤：

S1、粗制P47溶液：

起始物料为采用固相合成方法获得的多肽-树脂，经过适宜的切割剂将多肽从树脂上切割并切除侧链保护基的粗肽，该粗肽经过乙醚洗涤并充分干燥，采用阴离子交换树脂进行粗提，溶解P47粗肽，使用平衡液A平衡离子交换树脂，上样进行吸附，使用平衡液B平衡并去除杂质，使用洗脱液洗脱获得粗制P47溶液；

S2、反相色谱柱纯化操作：

利用反相色谱对粗制P47溶液加以第一次纯化，且为防止固定相在高比例水相体系中固定相塌陷的状况，对色谱柱中的硅胶表面加以亲水化修饰，纯化后获得A型P47溶液；

S3、反相HPLC精制：

利用反相HPLC对A型P47溶液进行精制，以十八烷基硅胶为固定相，使用平衡液C平衡，将A型P47溶液上样，以醋酸乙腈水溶液作为流动相进行洗脱，收集主峰既得精制P47溶液；

S4、P47纯品获得：

去除精制P47溶液中的有机溶液，随后将其置于冷冻干燥机进行真空冷冻干燥得到干燥的P47纯品。

进一步的，所述S1步骤中，粗制P47溶液获得后置于4摄氏度的旋转机中高速旋转30min，随后取出旋转后的粗制P47溶液置于冰上，在打开超声波细胞破碎机，功率随产品种类进行设定，根据说明书进行操作，超声时间控制在4s，间隔为8s，10min后取出粗制P47溶液。