[发明专利]一种小分子活性肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种小分子活性肽，其氨基酸序列为：LPAYPMP。其制备方法为：用碱性蛋白酶酶解鲍鱼内脏，酶解结束后灭酶，得到酶解液；酶解液经离心、粗滤和超滤处理，收集得到小于1kDa分子量的多条多肽，并分别冷冻干燥成粉末；取多肽冻干粉末进行序列鉴定，获得多条多肽序列，删除重复序列，筛选得到多条不重复的多肽；以蛋白质HMGR作为受体，通过对接软件将得到的多条多肽进行虚拟筛选，筛选出对接分数得分排名靠前的多肽，固相合成得到小分子活性肽。本发明小分子活性肽可以有效抑制细胞中的总胆固醇和总甘油三脂的积累，对胆固醇胶束溶解度的抑制率高，具有降血脂功效，可以应用于制备辅助降血脂药物，相比传统降血脂药物具有特异性高、毒副作用小的优点。

技术领域

本发明涉及多肽技术领域，尤其涉及一种小分子活性肽及其制备方法和应用。

背景技术

随着我国经济的日益发展，国民的日常膳食摄入变得更加广泛，高血脂症患病人群在我国逐年增加，国民健康受到了威胁。目前在临床中使用较多的降血脂药物多为他汀类药物，据可靠研究，他汀类药物的使用会有主要两方面的副作用，一个是转氨酶升高，一个是肌肉痛的不良反应风险。因此，通过食疗控制血脂的方式逐渐受到人们的推崇。然而目前人们对鲍鱼的加工利用主要集中在罐头、冷冻、鲜销等，鲍鱼的精深加工利用较低、下脚料浪费严重。

现已有的对鲍鱼活性的研究主要集中在性腺、内脏、壳以及鳃等下脚料的抗氧化活性上。目前关于开发天然源的降血脂肽的研究越来越热门，但鲍鱼内脏源的降血脂肽鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小分子活性肽及其制备方法和应用，其以鲍鱼下脚料为原料，获得具有降血脂功效的多肽，为鲍鱼下脚料的高值化加工利用提供新思路，也为开发天然降血脂产品拓展了资源。

为达到上述目的，本发明公开了一种小分子活性肽，其氨基酸序列为：LPAYPMP。

上述小分子活性肽的制备方法，其包括以下步骤：

S1.原料准备

选取鲍鱼的内脏作为原料；

S2.酶解

利用碱性蛋白酶酶解鲍鱼的内脏，酶解结束后灭酶，得到酶解液；

S3.过滤

酶解液经离心、粗滤和超滤处理，收集得到小于1kDa分子量的多条多肽，并分别冷冻干燥成粉末；

S4. 序列鉴定

取多肽冻干粉末进行序列鉴定，获得多条多肽序列，删除重复序列，筛选得到多条不重复的多肽；

S5.虚拟筛选

以蛋白质HMGR作为受体，通过对接软件将得到的多条多肽进行虚拟筛选，筛选出对接分数得分排名靠前的多肽，进行固相合成，得到上述的小分子活性肽。

优选地，步骤S2中，碱性蛋白酶添加量为的8000～12000U/g底物，pH值为9.5～10.5，底物与超纯水的比例为1：40～60，酶解温度为40～60℃，酶解时间为3～6h。

优选地，步骤S2中，碱性蛋白酶添加量为的10000U/g底物，pH值为10.0，底物与超纯水的比例为1：50，酶解温度为55℃，酶解时间为4h。

优选地，步骤S3中，酶解液采用平板离心机离心，采用陶瓷膜粗滤，得到的滤出液经1 kDa的膜超滤，收集得到小于1kDa分子量的多条多肽。

优选地，步骤S4中，取多肽冻干粉末经除盐柱进行除盐后，采用纳喷离子源的质谱仪进行质谱分析，得到多肽序列。

优选地，步骤S5中，运用对接软件Discovery Studio对蛋白质HMGR分子加氢、去水，进行能量最小化处理，以多肽分子以Discovery Studio Client绘制小分子作为配体，最后确定蛋白质HMGR的活性口袋，在口袋范围8，盒子边缘4的条件下虚拟筛选。