[发明专利]一种测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法

权利要求书

1. 一种测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 将mRNA进行变性；

(2) 使变性后的mRNA与内切核糖核酸酶在适于酶切的条件下孵育；

(3) 确定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布。

2. 根据权利要求1所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，步骤(1)的变性条件包括在75-98℃处理所述mRNA，变性时间为0.5-5min。

3. 根据权利要求1所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，步骤(2)中，适于酶切的条件包括在30-45℃使用所述内切核糖核酸酶处理所述变性后的mRNA，时间为10-40min。

4. 根据权利要求3所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，用于所述酶切的体系包括：0.1-2 mg/mL的内切核糖核酸酶、10×RNase H buffer和10-1000 pmol的变性后的mRNA。

5. 根据权利要求1-4任一项所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，所述内切核糖核酸酶为核糖核酸酶A。

6. 根据权利要求1所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，在步骤(3)中，使用液相色谱质谱联用确定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布。

7. 根据权利要求6所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，步骤(3)进一步包括对酶切后的mRNA在8000-15000 rpm离心步骤。

8. 根据权利要求6所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，用于所述液相色谱质谱联用的流动相包括：作为流动相A的六氟异丙醇-三乙胺-去离子水，和作为流动相B的甲醇。

9. 根据权利要求6所述的测定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布的方法，其特征在于，用于所述液相色谱质谱联用的色谱条件包括：Agilent AdvanceBio OligonucleotidesHPH-C18 , 2.7 µm, 2.1 mmx50 mm色谱柱；检测波长为260nm；柱温为40-65℃；流速为0.1-0.5mL/min；检测器为飞行时间质谱，鞘气温度为300-400℃，雾化气压力为30-50psi，鞘气流速为8-20L/min，喷嘴电压为800-1500V，毛细管电压为2000-4000V，干燥气流速为4-15L/min，干燥气温度为200-400℃。

10. 用于检测mRNA药物质量的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒能够确定mRNA 3’Poly(A)尾长度及其分布，所述试剂盒包括：

I. 内切核糖核酸酶，优选为核糖核酸酶A；

II. RNase H buffer；

III. 液相色谱质谱联用相关试剂，包括六氟异丙醇-三乙胺-去离子水和甲醇；

优选地，所述mRNA药物包括mRNA疫苗。