[发明专利]牛结节性皮肤病病毒阳性血清及其制备方法和应用

权利要求书

1.牛结节性皮肤病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，使用灭活疫苗接种健康阴性牛，制得中和抗体效价≥1:32的阳性血清；所述接种的次数≥2次；每次接种的灭活疫苗剂量≥6mL/头；

所述灭活疫苗的牛结节性皮肤病病毒含量≥0.5×10^7.0TCID₅₀/mL；

所述灭活疫苗由灭活的抗原原液与病毒佐剂复配得到；所述抗原原液由牛结节性皮肤病病毒接种宿主细胞培养得到；所述培养使用的维持液配方包括11801-211、V006201-010和CM-VA001；11801-211、V006201-010和CM-VA001的体积比为1-2:1-2:5-9；

所述抗原原液在灭活前，经400-600KD的中空纤维浓缩纯化处理；

所述病毒佐剂选自206佐剂；

所述宿主细胞选自MDBK细胞；

抗原原液使用的灭活剂选自β-丙内酯。

2.根据权利要求1所述牛结节性皮肤病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述健康阴性牛为2-3月龄。

3.根据权利要求1所述牛结节性皮肤病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述健康阴性牛的抗原和/或抗体检测结果为阴性；

所述抗原包括牛结节性皮肤病病毒；

所述抗体包括牛结节性皮肤病病毒抗体，还至少包括如下至少一种：牛口蹄疫病毒抗体、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒抗体、牛传染性鼻气管炎病病毒抗体。

4.根据权利要求3所述牛结节性皮肤病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述健康阴性牛的抗原和抗体检测结果为阴性；所述抗体包括牛结节性皮肤病病毒抗体、牛口蹄疫病毒抗体、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒抗体和牛传染性鼻气管炎病病毒抗体。

5.根据权利要求1所述牛结节性皮肤病病毒阳性血清的制备方法，其特征在于，所述接种的次数为两次；第一次接种和第二次接种的时间间隔为14-28天；牛结节性皮肤病病毒阳性血清的收获时间为第二次接种后的第N天，N≥7。

6.权利要求1-5任意一项所述制备方法获得的牛结节性皮肤病病毒阳性血清的应用，所述应用包括如下方式中的至少一种：

（1）制备用于牛结节性皮肤病病毒检验或鉴定的试剂或试剂盒；

（2）在牛结节性皮肤病灭活疫苗生产中用于外源病毒检验或细胞中和检验；

（3）制备牛结节性皮肤病病毒阳性血清标准品。