[发明专利]人类非小细胞肺癌组织基因特异位点甲基化水平检测引物及其应用

权利要求书

1.一种人类非小细胞肺癌组织基因特异位点甲基化水平检测引物，其特征在于：所述的引物序列包括：

上游扩增引物序列为：

5'- ATTCAGGGAAGCAGCCCCGGCGGCCAGCAG -3'；

生物素修饰的下游扩增引物序列为：

5'- ACCAAAACTTTACGAAATAATTGTAACTGC -3'-Biotin；

焦磷酸测序引物序列为：

5'- ATTCAGGGAAGCAGCCCCGGC -3'。

2.权利要求1所述一种人类非小细胞肺癌组织基因特异位点甲基化水平检测引物在制备焦磷酸测序试剂盒中应用。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述焦磷酸测序试剂盒包括列基因PCR扩增反应液、TaqDNA聚合酶、对照质控品、焦磷酸测序引物、包装盒。

4.根据权利要求3所述应用，其特征在于：所述序列基因扩增PCR反应液由PCR反应缓冲液、一对序列基因特异性上游扩增引物和生物素修饰的下游扩增引物组成。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述一对序列基因特异性上游扩增引物的终浓度为0.2 μM，所述生物素修饰的下游扩增引物的终浓度为0.2 μM：所述序列基因PCR扩增反应液的PCR扩增模板量为50ng。

6.根据权利要求3所述应用，其特征在于：PCR的扩增程序为：第一阶段：95℃ 15min，一个循环：第二阶段：94℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 30s，45个循环：第三阶段：72℃ 10min,一个循环。

7.根据权利要求2所述应用，其特怔在于：所述焦磷酸测序试剂盒的使用方法: PCR扩增产物经DNA变过程，纯化得到含生物素修饰的下游扩增引物的待测序单链，并和焦磷酸测序引物结合成杂交体，然后使用角磷酸序仪进行序列的检与分析。

8.权利要求2中焦酸测序试剂盒在检测肺癌组织中应用。

9.权利要求2中，磷酸序试剂盒在肺癌诊断中应用。

10.权利要求2中焦磷酸测序试剂盒在筛查肺癌中应用。