[发明专利]一种抗鸡CD86单克隆抗体的制备方法及应用在审
| 申请号： | 202310752184.6 | 申请日： | 2023-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN116655775A | 公开（公告）日： | 2023-08-29 |
| 发明（设计）人： | 商绍彬;尹诗;贺双江;郝小利;杨奕 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C07K14/705 | 分类号： | C07K14/705;C07K16/28;C12N15/70;C12N15/85;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91 |
| 代理公司： | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 许必元 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cd86 单克隆抗体 制备 方法 应用 | ||
1.一种制备重组鸡CD86蛋白的原核表达方法，其特征在于，将鸡CD86胞外区片段构建到原核表达载体pET-28a，经转化大肠杆菌中进行诱导表达，获得重组鸡CD86蛋白。
2.根据权利要求1所述的一种制备重组鸡CD86蛋白的原核表达方法，其特征在于，鸡CD86胞外区序列来自Genbank序列(Genbank登录号: EF554724.1)。
3.一种制备重组鸡CD86蛋白的真核表达方法，其特征在于，完整的鸡CD86基因被构建到真核表达载体pCAGGS上，重组质粒（pCAGGS-chCD86）转染DF-1细胞表达鸡CD86真核蛋白。
4.根据权利要求3所述的一种制备重组鸡CD86蛋白的真核表达方法，其特征在于，完整的鸡CD86基因序列来自Genbank序列(Genbank登录号: EF554724.1)。
5.一株抗鸡CD86蛋白单克隆抗体1C2，其特征在于，所述单克隆抗体1C2能够特异性识别真核和原核表达的重组鸡CD 86蛋白以及鸡巨噬细胞表面表达的天然CD86蛋白，并能用于流式细胞术表面染色。
6.权利要求5所述的抗鸡CD86蛋白单克隆抗体1C2杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于：将权利要求1所述重组鸡CD86蛋白免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术，经权利要求3所述的真核表达鸡CD86蛋白筛选而获得的单克隆抗体细胞株，即杂交瘤细胞株1C2；
所述杂交瘤细胞株1C2保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：中国武汉，武汉大学；保藏日期为2023年6月18日；保藏编号为CCTCC NO: C2023173。
7.权利要求5所述的抗鸡CD86蛋白单克隆抗体1C2用于Western-blot、间接免疫荧光试验、流式细胞术检测鸡免疫细胞和组织中CD86表达的应用。
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