[发明专利]一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法

说明书

本发明涉及一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其方法包括：取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30‑45d后膨大的子房清洗消毒，剥取子房中的未成熟杂种胚珠并接种到1/2MS培养基上，暗培养后用1/2MS+2.0mg/L6‑BA+0.1mg/LIBA+50mg/LCW的愈伤组织诱导培养基进行愈伤组织诱导，用1/2WPM+0.3mg/LIBA的增殖与分化培养基进行增殖与分化，用生根培养基生根培养后，炼苗移栽即可，能够提高其种间杂交育种效率，出愈率达70‑80％，分化率达75‑80％，生根率达95‑100％，缩短育种周期，操作方法简单、成本低、成活率高。

技术领域

本发明属于绣球生物技术育种领域，具体涉及一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法。

背景技术

绣球别名八仙花，绣球花科绣球属植物，其花色丰富，花型多样，花期较长，具有较高的观赏价值。绣球属有73种，我国作为其种质资源分布中心，有46种10变种，在盆栽、园林绿化、切花等领域应用甚广，已成为第五大鲜切花。但是，我国绣球育种起步晚、成效差，栽培品种主要从国外引进，如国内市场占有率第一、被誉为“绣球王者”的‘无尽夏’(H.macrophylla‘Endless Summer’)由美国贝利苗圃公司引进。然而，包括‘无尽夏’的大花绣球，抗寒性普遍较差，国内露地栽培局限于长江流域及以南地区，相比之下，乔木绣球的耐寒性非常强，如‘贝拉安娜’(H.arborescens‘Annabelle’)可耐-30～-40℃的低温，是绣球耐寒种质培育的理想亲本。因此，开展大花绣球与乔木绣球的种间远缘杂交，获得抗寒性大幅提升的杂交后代，对绣球品种改良具有重要意义。

杂种的不孕育性是远缘杂交育种的主要障碍，受精后杂种胚、胚乳和子房组织之间缺乏协调性将导致幼胚不发育或中途停止发育，无法获得杂交后代。为此，通过胚挽救技术，在杂交幼胚败育前对杂交子房、杂种胚珠、杂交幼胚进行离体培养，可以克服受精后的发育障碍，避免远缘杂种胚败育以获得杂种植株。现有技术中利用幼胚拯救获得绣球杂种的方法，如专利CN105494078A、专利CN114375840B，主要包括依次进行的子房消毒、接种、增殖培养和生根培养工序，其主要缺陷在于采用切去基部的子房接种，由于子房壁等母本组织大量存在，极可能形成愈伤组织并分化发育成苗，形成假杂种，从而增加了对真杂种的甄别难度，且其采用诱导培养基成分组成不适，导致愈伤组织出愈率不足，将不利于后续增殖培养，增殖培养基成分不适将进一步导致分化率下降，进而影响生根，而在增殖培养与生根培养之间采用叶片诱导愈伤组织培养，将增加育种周期、生产成本、操作难度，难以满足应用需求，不易推广。

其次，授粉后胚拯救时期不适，消毒采用的升汞为剧毒药剂不易获取且使用后易在植物材料上残留，对成活率有一定影响，将造成育种成活率下降。

此外，生根培养时生根培养基成分不适，将导致生根率下降；培养温度、光照强度、光质、光周期等环境因素不适将导致培养效果下降，不利于愈伤，进一步降低大花绣球与乔木绣球种间种间杂交育种效率。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一，本发明提供一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，提高其种间杂交育种效率，缩短育种周期，操作方法简单、成本低、成活率高。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种获得大花绣球与乔木绣球种间杂交后代的方法，其方法包括以下步骤：

(1)子房消毒：取大花绣球与乔木绣球种间杂交授粉30-45d后膨大的子房，清洗消毒；

(2)接种：剥取步骤(1)消毒后子房中的未成熟杂种胚珠并接种到1/2MS培养基上；

(3)暗培养：将步骤(2)接种后的培养基进行暗培养至杂种胚珠变绿萌发；

(4)愈伤组织诱导：将步骤(3)暗培养后转绿萌发的杂种胚珠接种到愈伤组织诱导培养基，光周期培养，期间转换一次新鲜的愈伤组织诱导培养基；