[发明专利]鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒及其非诊断性检测方法

权利要求书

1.鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：包括PCR检测引物、阳性对照、阴性对照和空白对照，所述阳性对照为鸡伤寒沙门氏菌ATCC 9184基因组DNA，阴性对照为鸡白痢沙门氏菌ATCC10398基因组DNA，空白对照为灭菌双蒸水，所述检测引物包括：

For：5’-CGTGGAGCGGCATTTATATATACAG-3’

Rev：5’-ACTACCGTTGTGGTGATACTCTGCG-3’。

2.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为鸡伤寒沙门氏菌ATCC 9184基因组DNA，阴性对照为鸡白痢沙门氏菌ATCC10398基因组DNA，空白对照为灭菌双蒸水。

3.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述PCR检测体系的组分为：每25μl反应液中包括10×PCR缓冲液2.5μl、dNTPs 2μl、Taq DNA聚合酶0.25μl、检测引物组1μl、DNA模板1～2μl以及适量的灭菌双蒸水。

4.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述PCR检测引物包括SED ID NO 1和2所示的引物。

5.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述检测引物浓度为10μM。

6.根据权利要求1所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述dNTPs包括dGTP、dCTP、dATP、dTTP，各组分浓度均为2.5mM。

7.根据权利要求1-6所述的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒，其特征在于：所述试剂盒不包括其它引物。

8.一种使用鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒进行非诊断性检测的方法，包括以下步骤：

S1：使用煮沸法或商品化试剂盒提取细菌基因组DNA，得到检测模板。

S2：PCR扩增，将10×PCR缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、检测引物组以及DNA模板加入无菌PCR反应管中，添加灭菌双蒸水至总体积25μl，同时设置阳性、阴性、空白对照，使用PCR仪进行扩增反应；采用2％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行电泳检测并分析结果；所述检测引物组的引物包括：

For：5’-CGTGGAGCGGCATTTATATATACAG-3’

Rev：5’-ACTACCGTTGTGGTGATACTCTGCG-3’。