[发明专利]鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒及其非诊断性检测方法

说明书

本发明公开了一种用于鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别的试剂盒及其非诊断性检测方法。所述试剂盒包括PCR检测引物、阳性对照、阴性对照和空白对照，所述阳性对照为鸡伤寒沙门氏菌ATCC9184基因组DNA，阴性对照为鸡白痢沙门氏菌ATCC10398基因组DNA，空白对照为灭菌双蒸水，所述引物包括：For：5’‑CGTGGAGCGGCATTTATATATACAG‑3’；Rev：5’‑ACTACCGTTGTGGTGATACTCTGCG‑3’。本发明还公开了一种应用所述试剂盒鉴别鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌的PCR方法。本发明方法具有快速、简单、特异性强、灵敏度高的优点，相比传统的鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌生化鉴别方法，在检测时间与检测成本方面具有较大优势，适用于临床批量检测。

技术领域

本发明属于分子生物学检测技术领域，涉及一种用于鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒及其非诊断性检测方法。

背景技术

鸡白痢和禽伤寒是家禽重要的烈性细菌传染病，也是兽医学界较早发现的两种细菌性疾病，其病原分别是鸡白痢沙门氏菌(Salmonella GallinarumbiovarPullorum,S.Pullorum)和鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella GallinarumbiovarGallinarum,S.Gallinarum),目前这2种病原已被归类为鸡伤寒血清型所属的2种不同生物型。鸡白痢沙门氏菌主要引起雏鸡急性系统性疾病，死亡率最高可达90％以上，而鸡伤寒沙门氏菌则引起急性或慢性败血病，主要危害成年家禽。尽管许多发达国家已在商业鸡群上对上述疾病实现了净化，但它们仍然是发展中国家养禽业的顽症，并造成严重的经济损失。

鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌是沙门氏菌属中非常独特的一类，因其不能表达鞭毛，所以不具有运动性，在琼脂平板上的菌落大小也明显小于其它血清型，此外在很多菌落呈黑色金属光泽为特征的沙门氏菌显色培养基上(如SS、XLD、BS、DHL、XLT4等)，鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌均为无色透明菌落，所以通过运动性、菌落大小、菌落颜色等方式很容易与其它血清型沙门氏菌区分。然而由于鸡白痢和鸡伤寒这2种沙门氏菌生物型在流行病学、临床症状、防控措施等方面存在诸多相似之处导致难以鉴别。研究表明，由于鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌均无运动性，且具有相同的抗原因子，所以很难通过常规诊断或血清学实验进行区分。虽然有研究表明，鸟氨酸和卫矛醇这2种生化指标可作为鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的“金标准”，但因无法满足快速、批量化的检测要求导致其应用受到限制。随着分子生物学的快速发展，目前也报道了一些鉴别鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌的分子检测技术，但上述方法有的需要使用多对引物，有的需要对扩增产物进一步酶切鉴定，且有的方法还存在特异性问题，所以仍需进一步开发简便的分子鉴别方法。

为了能够快速、准确、简便的鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌，本发明根据已公开的沙门氏菌基因组序列，通过分析筛选出特异性检测靶标，进一步设计检测引物，开发出用于快速鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的实用技术。

发明内容

本发明针对传统技术在鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌中存在的不足，提供了一种特异性鉴别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的分子试剂盒及其非诊断性检测方法。

本发明技术方案如下：

本发明提供了一种鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒及其非诊断性检测方法，所述鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别试剂盒包括10×PCR缓冲液、2.5U/μl Taq DNA聚合酶、10Mm dNTPs、PCR检测引物、阳性对照、阴性对照和空白对照，所述阳性对照物为鸡伤寒沙门氏菌ATCC 9184基因组DNA，阴性对照为鸡白痢沙门氏菌ATCC10398基因组DNA，空白对照为灭菌双蒸水；所述引物组的引物包括：

For：5’-CGTGGAGCGGCATTTATATATACAG-3’

Rev：5’-ACTACCGTTGTGGTGATACTCTGCG-3’。