[发明专利]高纯度蛋白质的制备及其应用

说明书

本发明涉及一种人白细胞介素-2及一种应用遗传工程技术制备它的方法。

白细胞介素-2（也称为T细胞因子，简称为IL-2），是用同种异体抗原或外源凝集素刺激T细胞而产生的一种淋巴因子。〔science    193，1007（1976）;Immunological    Reviews，51，257（1980）〕。IL-2可使该细胞在体外生长，并重新获得它们的生物功能，因而有利于T细胞的长期培养。另外，据报道IL-2可促进胸腺细胞的促细胞分裂素的活性，促使裸鼠脾细胞产生T细胞依赖抗原（T细胞取代因子），或促进杀伤细胞的分化和增殖〔The    Journal    OF    Immunology，123，2928（1979）;Immunological    Reviews，51，257（1980）〕。

由于IL-2的应用已经使杀伤T细胞，辅助T细胞及天然杀伤细胞克隆化。〔Natural，268，154（1977），The    Journal    OF    Immunology，130，981（1983）〕。除了直接用于T细胞或自然杀伤细胞克隆化外，IL-2还可用于选择某种抗原的活的特异性杀伤T细胞。例如在体外杀伤T细胞可以识别肿瘤抗原，并破坏肿瘤细胞。将IL-2诱导产生的特异性肿瘤杀伤细胞注射到动物体内，则可能抑制和防止肿瘤的生长〔TheJournal    OF    Immunology，125，1904（1980）〕。此外，IL-2还可以诱导IFN-Y的产生〔The    Journal    OF    Immunology，130，1784（1983）〕以及活化天然杀伤细胞〔The    Journal    OF    Immunology，130，1970（1983）〕。

上述实验资料提示IL-2是一种有前途的抗肿瘤因子。已知IL-2在缺乏胸腺细胞功能的裸鼠体内可使辅助T细胞的功能得以恢复〔European    Jourual    OFImmunology，10，719（1980）〕或恢复抗肿瘤细胞的杀伤T细胞的产生。〔Nature，284，278（1980）〕，因此IL-2对治疗免疫损伤疾病是很有前途的。

大规模生产IL-2的方法迄今尚未成功。由于缺乏纯的IL-2，临床应用受到阻碍。人们急切盼望着能研制出一种简便、廉价、大规模生产高纯度IL-2的新技术。

Taniguchi等人以人T细胞白血病细胞株Jurkat作为原材料或起始物分离到IL-2mRNA。通过使用IL-2mRNA克隆了人IL-2基因。据报道，由此可推断出人IL-2蛋白的氨基酸序列，并可在cos-7细胞中表达了这个基因〔Nature302，305（1983）〕。以后Later等人报告说人类脾细胞诱导的IL-2基因已经被克隆，并可在大肠杆菌（Escherichia    coli）中表达〔Nucleic    Acids    Resarch，11，4307（1983）〕。然而到目前为 止IL-2样物质的存在也仅是在TCGF活性测定的基础上而进行判断的。还没有报告说经过人IL-2的DNA密码的转录而产生的人IL-2蛋白被提纯成纯净的形式。

本发明人已经研制出一种新技术，即利用基因控制方法对人IL-2进行克隆化，从而得到真正纯净的非糖基化的IL-2蛋白。由于使重组的DNA分子进入宿主并在其中表达人IL-2基因，而建立了生产真正纯净的、非糖基化的，人IL-2蛋白的方法并完成了目前的发明。

本发明提供了真正纯净的非糖基化的人IL-2蛋白以及生产上述人IL-2蛋白的方法，它包括培养一种带有DNA的转化体，该DNA带有编码人IL-2的碱基序列，以及从培养液中提取该蛋白。

本实验中所用的，编码人IL-2的DNA，是由图2中1～133密码子规定的，如DNA（Ⅰ），该DNA（1）碱基序列在5′端可具有ATG或如图2中描述的S1～S20密码子所代表的信号序列，在3′端可能是TAA、TGA或TAG，更可能是TGA。