[其他]用细菌培养生产透明质酸

权利要求书

1、一种生产透明质酸的方法，包括：

在二氧化碳富集，无氧的情况下在生长培养基中使可产生透明质酸的链球菌的肉汤培养物发酵；

使细菌细胞与发酵后肉汤分离；及从肉汤剩下的组成物中离析透明质酸。

2、为权利要求1所述的方法，其中在接种前通过一万分子量截止过滤器对生长培养基进行过滤，使生长培养基做到无热原。

3、为权利要求1所述的方法，其中细菌细胞分离步骤包括首先将三氯乙酸加进肉汤。

4、如权利要求3所述的方法，其中三氯乙酸应加到使发酵混合物的最终浓度为5-6%为止。

5、为权利要求3所述的方法，其中添加上述三氯乙酸后细菌的生长就终止。

6、为权利要求1所述的方法，其中离析的完成是通过分离酸及那些具有类似的或较高分子量的肉汤组成物然后用沉淀法使酸与那些相似的肉汤组成物分离。

7、如权利要求6所述的方法，其中沉淀是通过将透明质酸及剩余肉汤组成物加到醇中去而不作实质性混合来完成的。

8、如权利要求1所述的方法其中离析是通过使肉汤和细胞分离渗析过滤肉汤，及将溶液加到有机溶剂中去而不作实质性混合，使酸在溶液中沉淀来完成的。

9、如权利要求1所述的方法，其中发酵步骤包括在发酵全过程中将PH值控制在6.5-7.5的范围中基本上为恒定值±0.1、且将温度控制在37±1℃。

10、如权利要求9所述的方法，其中PH值的控制是通过用PH探头/控制器来自动加碱。

11、如权利要求1所述的方法，其中溶解的二氧化碳浓度维持在约为5-10%。

12、如权利要求1所述的方法，其中在细菌停止生长前生长到密度为每毫升2亿细胞。

13、如权利要求1所述的方法，其中细菌为18型化脓性链球菌。

14、如权利要求6所述的方法，其中过滤生长培养基是在用细菌培养物接种前通过一万分子量截止过滤器进行的，且实行剩余步骤是在100级的净室中并使用无热原容器的条件下进行的。

15、如权利要求14中所述的方法，进一步包括：精制离析出的透明质酸是在将其溶解在温和的碱性缓冲溶液中，用混合的溴化烷基三甲基铵使透明质酸沉淀，在稀氯化钠溶液中使沉淀物再悬浮及通过将悬浮物加到乙醇，且不作搅拌，对其再沉淀得酸。

16、透明质酸其分子量组份范围约从一万到二百万道尔顿，其平均分子量约5.5万道尔顿±约20%其生产是通过：

在二氧化碳富集的生长培养基中在无氧条件下使可生产透明质酸的链球菌细菌的肉汤培养基发酵;

使细菌细胞与发酵的肉汤分离;及从肉汤的剩余组成物中离析透明质酸。

17、为权利要求16所述的酸，其中细菌为18型化脓性链球菌。

18、为权利要求16所述的酸，其中离析是通过分离酸与那些有相似的或较高分子量的肉汤组成物及然后用沉淀法将酸与那些相似的肉汤组成物分离来完成的。

19、如权利要求17所述的酸，其中沉淀是通过将透明质酸及剩余的肉汤组成物加到乙醇中去且不作任何实质上的混合来完成的。

20、如权利要求16所述的酸，其中离析是通过使肉汤和细胞分离，渗析过滤肉汤及将溶液加到有机溶剂而不作任何实质性的混合使酸在溶液中沉淀

21、如权利要求16所述的酸其中蛋白质的含量范围在约0.3%与约0.03%之间，1%的溶液的紫外线吸收在260毫微米时为0.314，在280毫微米时为0.169，且粘度约为300厘拖。

22、为权利要求21所述的酸，其中离析是通过分离酸与那些有相似的或较高分子量的肉汤组成物及然后用沉淀法将酸与那些相似肉汤组成物分离来完成的。

23、为权利要求22所述的酸，其中沉淀是通过将酸及剩余的肉汤组成物加进乙醇中去而不作实质性的混合来完成的。

24、如权利要求21所述的酸，其中离析是通过使肉汤与细胞分离渗析过滤肉汤及将溶液加到有机溶剂中去而不作实质性的混合，使酸在溶液中沉淀来完成的。