[其他]普瑞霉素的成份和抗菌复合物的分离过程

说明书

本发明涉及的是分离普瑞霉素混合物获取普瑞霉素的不同成份，和从抗菌复合物中分离这些成份的过程。本发明的进一步目的是含有上述成份的增效合剂和它们的配制过程。

普瑞霉素抗菌复合物可由人工培养热多孢霉属的galeriensis（属于链丝菌类）获得，经发酵得到的其制剂已由Hugarian在专利说明No.153，593中叙述过。

普瑞霉素是大环内脂类抗菌素，在先有技术（J.Chem.Soc，Perkin    I.P816，1974）中以一单一化学式为其特点的：｛5-[18-（αD-阿糖胶-呋喃糖基氧（furanosyloxy））-2-丁基-3，7，11，15，19，21，23，35，27-九羟基-4，16，32，34-四甲基-1-氧-环氧36环-16，32-二烯-35基]-4-羟基己基｝-胍的硫酸盐。

普瑞霉素是一种非常有效的广泛应用的抗菌素，它不但对抵抗革兰氏阳性细菌有效，也对抵抗多种耐药菌族有效，在抵抗细菌时耐药性仍不会发展。

我们以前的试验是参照发酵得到的普瑞霉素不是单一的物质的事实。色谱法的最近发展允许我们对普瑞霉素物质混合物进行更详细地检验。

我们发现，发酵得到的普瑞霉素，含有三种主要成份和六种次要成份，我们发明的过程是适于定性的，微量的分离这些成份。我们也意外地发现，这些成份能相互增强效力，即它们表现出增效活性。

我们努力的目标是分离和隔离由热多孢霉属的galeriensis产生的抗菌混合物的各种成份。一系列的色谱法都已试过，并且发现，薄层色谱法对上述过程是最有效的。

在薄层色谱法（TLC）领域内，采用带有硅胶的吸附层的商品色谱片，在成份分离中取得了意外的好结果。

根据我们发明的分离过程的比较好的实例，从热多孢霉的galeriensis菌丝分离出来的，没有脂肪的，粗产品形式的，半纯产品的，或纯净产品的原液施加到TLC薄层色谱片上，经展开后，检验得到的斑点，并且分离出抗菌复合物的主要成份和（或）次要成份。

为了配制从培养介质中收取粗产品形式的，半纯的或纯产品的原液，我们使用了含1-4个碳原子的醇的水溶液，例如，比较适用的是体积为，乙醇∶n-丁醇∶水为25∶25∶50的混合物。借助于上述混合物可以制备0.5-1w/v%的原液，而且把50-200μg的被检测的物质施加到薄层色谱片上。

在我们的试验中，首先使用商品硅胶色谱片Kieselgel    60    F254，尺寸为20×20cm，硅胶厚度为0.2mm。为了实现普瑞霉素混合物的最佳分离，在此种片上进行了各种溶剂混合物的试验。

当采用含有囟代烃，有机酸，乙醇，水，更好的是还有醛作为洗提剂时，可以获得最佳分离。

下列溶剂可以用作为洗提剂：囟代脂族烃（如氯仿，二氯甲烷），特别是含1-4个碳原子的脂族羧酸（如甲酸，醋酸），囟代脂族羧酸（如-氯、二氯、三氯醋酸，三氟醋酸），芳族羧酸（如苯甲酸），有机磺酸（如甲基磺酸，甲苯磺酸），醇类，特别是脂族直链或支链含1-10个碳原子的醇类（如甲醇，乙醇，n-丁醇，异丙醇），醛类，特别是含1-4碳原子的脂族醛类（如36%甲醛）或者是上述物质的水溶液混合物。

对于分离普瑞霉素抗菌素的成份，下列溶剂可产生最好的效果：

Ⅰ.n-丁醇∶冰醋酸∶水为60∶10∶30的混合物的上层。

Ⅱ.n-丁醇，甲醇，冰醋酸和水的比例为75∶2∶8∶15的混合物。

Ⅲ.氯仿∶甲醇∶冰醋酸∶水为45∶30∶15∶20的混合物的下层。

Ⅳ.氯仿，甲醇和水的比例为50∶35∶14∶1的混合物。

Ⅴ.氯仿，甲醇，甲酸，水，甲醛和n-丁醇的比例为130∶53∶6∶9∶3∶

3的混合物。

Ⅵ.氯仿，甲醇，甲酸，水，甲醛和n-丁醇的比例为160∶53∶6∶9∶3∶3的混合物。

Ⅶ.15份重量的一氯代醋酸溶解在氯仿，甲醇，甲酸，水，甲醛和n-丁醇的比例为125∶53∶9∶3∶3的混合物中。

Ⅷ.溶液Ⅲ，氯仿和甲醇的比例为15∶2∶1的混合物。