[其他]乙型肝炎抗原组合物的制备方法

说明书

本发明是关于一种用作疫苗或疫苗中间体的溶液或粒子悬浮液。具体的讲，本发明涉及带有新型高效免疫粒子的乙型肝炎表面抗原（HBs    Ag）。本发明是关于该种粒子的制备过程及其用于例如人和黑猩猩类的动物免疫抗乙型肝炎病毒的方法。

现在称为乙型肝炎表面抗原（HBs    Ag）的东西与乙型肝炎病毒的关系许多年以前就被Alfred    M.Prince（Pro.Nat.Acad.Sci（U.S）60∶814-821，1968）所明确鉴定。该抗原主要位于嵌在颗粒大小约为18-24纳米的酯蛋白颗粒膜上的蛋白质表面以及具相似直径的丝状体上。现在已知其表现为类似膜的，包围乙型肝炎病毒（HBV）颗粒的膜的碎片，亦知其为“戴恩”（Dane）颗粒。

此后，具有该种粒子的疫苗被Blumberg等人发表于美国专利第3，636，191号，以后，Prince和其他人发表了别的具有由戴恩颗粒和丝状体得到的膜蛋白的乙型肝炎病毒疫苗。这些戴恩颗粒和丝状体含有或结合有发现于慢性乙型肝炎病毒的许多携带者身上的乙型肝炎e抗原。

因为进行了上述的工作，抗乙型肝炎病毒疫苗被引进已有HBs    Ag颗粒的美国。该疫苗为酶解含有由慢性感染的HBV携带者的颗粒衍生出来的粒子的HBs    Ag而获得，由前述美国专利第3，636，191号有此描述。本疫苗用昂贵的纯化方法所制备，结果其免疫原性大部分丧失。结果是必须给予相对来说大剂量的最终抗原（HBs    Ag）以得证足够的免疫反应。因为这些因素，所以该疫苗只能以相当高的价格得到，大约每支30美元或更高。因为需要独特的注射和两种辅助剂，所以现在在美国约需花费100美元以获得抗乙型肝炎免疫，这样的价格在世界上那些对这种疫苗的需求最大的地方是支付不起的。

因此，现已需要提供一种含有乙型肝炎表面抗原的乙型肝炎疫苗，该抗原以相当纯的形式存在，因而免疫原性大大地增强，所以可使用小得多的剂量而且花费又不太昂贵。当然，存在于起始血浆中的感染病毒已被完全灭活也是必需的，用以保证没有感染的危险。

乙型肝炎主要感染那些居住在亚洲和非洲的发展中国家的居民，在那里用于公共健康检查的资金有限。在二十世纪，有义务提供这样一种疫苗，用于那些被乙型肝炎病毒感染所威胁的，其结果是受到随之而来的肝癌和肝硬化发展威胁的无数人们的预防，并以能付出的价格提供该疫苗。在发展中世界的许多国家里，需要使免疫必须花费每人少于1美元。如果真要使用疫苗的话。

根据前述内容，由本发明提供的疫苗或疫苗中间体包含具有乙型肝炎表面抗原（HBs    Ag）粒子，该抗原已经基本上被转化成具有新的在自然界从未被发现过其形态的形式，并具有人惊奇地提高了的免疫原性。本发明的疫苗的特征在于，含有以重量计少于5%的血清蛋白，除了辛酸钠稳定血清白蛋白以外，实际上最好是没有血清蛋白质。

已经发现用于使在纯化后可能存留下的活病毒灭活的独特的快速加热方式，不但象黑猩猩试验所看到的那样病毒被灭活了，而且大部分粒被转化成新的形态的形式。它含有加热之前不存在的15-30纳米直径的丝状体形式。这些丝状形式包括图1和电子显微图所图解说明的新形态。这些形态包括直纤维，闭合环状或环状形纤维以及许多种类的分枝纤维。

一般说来，含有以这样希奇古怪的纤维状结构存在的粒子的HBs    Ag百分率用电子显微镜检查在15-75%之间。以含有已经转化为新的纤维状结构粒子起过全部含有粒子50%的HBs    Ag为更好。

另外，本发明疫苗可以其制备方式来表示其特征。一般说来，疫苗按下列步骤制备：

A.从血浆中沉淀HBs    Ag，例如，含有HBs    Ag的人血浆用聚乙二醇处理后，可从其中含有的其它血清蛋白质中分离出HBs    Ag;

B.分离出的HBs    Ag在羟基磷灰石上负吸附，进一步除去大部分血清蛋白;

C.这样吸附的HBs    Ag等密度离心分离残余的完态戴恩颗粒，并进一步除去残留的微量杂质血清蛋白;

D.对离心分离出的粒子加热使之热灭活，浓度为0.5-10mg/ml，温度101-104℃，2-5分钟，然后冷却热粒子，例如将它们置于冰水浴中。