[其他]重组体DNA及其用途

说明书

本发明关于一种新的重组体DNA及其用途。

B型肝炎是一种由病毒引起的疾病，通常在非洲，东南亚及远东的热带地区发生，一般人也认为它是引致慢性肝炎，肝硬化及肝癌的原因。这种病疾的病原是肝炎B病毒（以下简称HBV），是一种DNA病毒。它是一种直径42nm的球状粒子，而又根据其发现者的名字，叫作戴恩（Dane）粒子。在这种粒子的外层，有HBV表面抗原的存在。它们按抗原的不同性质，被分类为adr，adw，ayr，ayw等，而adw与adr这两类，则在日本出现。

在B型肝炎病人的血内，探测到有小型的球状和丝状粒子，也有戴恩粒子的存在，而且已经确定在这些粒子中有类似戴恩粒子的HBsAg。现对已知道在其他病毒方面，对抗病毒外在抗原的抗体能防止病毒之感染。而在HBV方面，则可考虑生产以HBsAg为主的抗肝炎B疫苗。不过，由于受到HBV感染的，只有人类和人猿，所以尝试培养HBV感染细胞都未能成功。因此，HBsAg只能从受感染的病人的血液中获得。这样获得的微粒子量，只足够供给实验材料的需求，而不足够用作生产疫苗。

目前分子生物学的进步，已足以能把一种外来蛋白质的DNA密码，引入一株要被改造的微生物中。如果在微生物株内，出现HBsAg的结构基因（以下称HBsAg基因），便会产出大量不受HBV感染的HBsAg，因而为制成肝炎B疫苗铺路。

至于现时已发现的四种HBsAg（即adw，adr，ayw，ayr）其中之一及在欧美很常见的ayw，其HBsAg基因的存在部位与其顺序都已能决定，〔Galibert，F·et    al，Nature，281，646（1979）;Charnay，P·etal，Nucleic    Acids    Res·，7，335（1979）〕，而且也有有关其作为大肠杆菌的报告〔Charnay，P·et    al·，Nature，286，393（1980）;Edman，J·C·et    al·Nature，291，503（1981）〕。另一方面，有关在日本常见的adw与adr，目前有些发明家能成功地制成含adw型HBsAg基因的DNA。他们已经确定了这样组成的基因的DNA顺序，及在基因组的部位，因而为通过用重组体DNA改造而培养成的基因转化细胞，大量生产HBsAg作好了准备。（日本专利暂行公开194897/83号;20/796/83号及74985/84号）

虽然最近很多人的注意力都集中在使用酵母作宿主有机体的公式系统上，但第一个形成HBsAg的实验是由Velenzuela，P·et al公司通过使用S酵母的转化细胞安成的。〔Nature，298，347（1982）〕报告上说，adw₂类的HBsAg基因与位于酵母醇脱氢的5′不编码区的催化剂下游会合，而这基因会在酵母内出现，在每公升的培养物介质中，产生10至25μg的HBsAg粒子。由于这些HBsAg粒子的粒子结构特质，与人类血清中的22nm粒子的特质相近，所以便证明酵母能够用作宿主有机体。稍后，Miyanohara A·et al公司〔Proc·Natl·Acad·Sci·USA，80，1（1983）〕报导说，adr型HBsAg基因会在使用位于酵母的可阻酸磷酸酶基因（PHO5）的5′不编码区的催化剂在每公升培养基中生产340μg的HBsAg粒子时出现。Hitzeman，R·A·etal公司〔Nucleic    Acids    Res，11，2745（1983）〕认为一种不明的HBsAg会在使用位于酵母3-磷酸甘油酸激酶基因的5′不编码区的催化剂，于每公升的培养基内生产50μg的HBsAg时出现。Murray    K·etal公司〔The    EMBO    Journal    3，645（1984）〕也曾经有关于使用PHO5催化剂时出现的adyw型HBsAg的报导，结果形成相等于少于0.1%细胞蛋白的HBsAg。

使用传统方法所获的HBsAg是这么少，因此便认为需要大大地增加产量。