[发明专利]抗尿激酶单克隆抗体，带有它的基质，其试验方法和使用它的生化试验药盒

权利要求书

1、一种制备能产生抗尿激酶单克隆抗体的杂交瘤细胞的方法，经过培养，该杂交瘤细胞能够产生具有如下特征的抗尿激酶抗体：

a)其为IgG1，

b)当基本上按照Tsapis等人(Eur.J.Biochem64，369[1976])所述的方法测定时，其固定人尿激酶的亲和常数为(1.42±1.5)×10⁷/摩尔，

c)它结合高分子量(54000)尿激酶和/或单链尿激酶前体，而不与低分子量(33000)尿激酶结合，

d)它结合尿激酶A链的18000蛋白水解片段，

e)除了尿激酶以外，它不与血清或尿的活性内肽酶结合，

它包括将被分子量为54000的尿激酶免疫的宿主细胞与同种动物的骨髓瘤细胞在有融合促进剂存在的条件下进行体细胞融合，用酶联免疫分析法并使用常规抗尿激酶抗血清筛选所要的能产生抗尿激酶抗体的杂交瘤细胞，检测其免疫学类别特异性、亲和常数，及所产生的抗体的特异性抗原决定部位。

2、根据权利要求1所述的方法，其中所述的体细胞是鼠脾细胞，且骨髓瘤细胞是鼠骨髓瘤细胞。

3、根据权利要求1所述的方法，其中所述的骨髓瘤细胞是鼠骨髓瘤细胞X63-Ag8653。

4、根据权利要求1所述的方法，其中被尿激酶所免疫的宿主是兔。

5、根据权利要求1所述的方法，其中所述的融合促进剂是聚乙二醇。

6、根据权利要求5所述的方法，其中所述的融合促进剂是聚乙二醇6000（PEG6000）。

7、制备权利要求1所述的抗尿激酶单克隆抗体的方法，它包括在合适的宿主或培养基中培养按照权利要求1的方法所获得的杂交瘤。

8、制备权利要求1所述的抗人尿激酶单克隆抗体的方法，该抗体另外的特征在于：

a）它不损害尿激酶的酶学活性;

b）其等电点约为5.75。

9、根据权利要求1所述的制备抗人尿激酶单克隆抗体的方法，其中单克隆抗体进一步的特征在于，当其与适宜的基质结合时，它能在pH4.5-8.0时，甚至在有0.5摩尔氯化钠水溶液存在时结合抗原，并在0.5-1摩尔氯化钠水溶液中于pH3.0-4.0时释放出所结合的抗原。

10、一种从生物来源纯化54，000MW尿激酶或其单链尿激酶前体的方法，它包括将一种生物源或其浓缩物在pH4.5～8.0时与一种通过将抗尿激酶抗体与选自琼脂糖、改进的或活化的琼脂糖、交联葡聚糖、纤维素或羧甲基纤维素的基质交联而获得的免疫吸附剂接触以将54，000MW尿激酶或其单链尿激酶前体选择性地与免疫吸附剂结合，用pH6-8的缓冲液冲洗，用含有或不含有0.5-1摩尔NaCl水溶液（pH3.0-4.0）的洗脱液洗脱，将所结合的抗原从免疫吸附剂上释放下来，其中所说的抗体具有如下特征：

a）其为IgGl，

b）当基本上按照Tsapis等人（Eur.J.Biochem 64，369〔1976〕）所述的方法测定时，其固定人尿激酶的亲和常数为（1.42±1.5）×10⁷/摩尔，

c）它结合高分子量（54000）尿激酶和/或单链尿激酶前体，而不与低分子量（33000）尿激酶结合，

d）它结合尿激酶A链的18000蛋白水解片段，

e）除了尿激酶以外，它不与血清或尿的活性内肽酶结合。

11、根据权利要求10所述的方法，其中抗原与免疫吸附剂的结合也可以在有浓度高达0.5摩尔的氯化钠水溶液存在时完成。

12、根据权利要求10所述的方法，其中所获的尿激酶产物具有下述性质：

a）它的血纤维蛋白的溶解值高于130000Iu/ml，

b）它富含有高分子量尿激酶或其单链尿激酶前体，

c）实际上不含低分子量尿激酶，

d）它的血纤维蛋白溶解活性/酯酶分解活性的比值高于2000，

e）它实际上没有促凝血酶原激酶污染物（在浓度为200Iu/ml时凝血活性为零）。