[发明专利]抗尿激酶单克隆抗体，带有它的基质，其试验方法和使用它的生化试验药盒

说明书

本发明涉及一类新的Ig G₁单克隆抗体，它们针对人类尿激酶上的抗原决定部位，选择性地与高分子量的尿激酶（5400）或其单链前体相结合，而不与小分子量的尿激酶（3300）结合，并具有对尿激酶的恒定的亲和性，该亲和性适用于以免疫吸附为基础的纯化系统而不损害尿激酶的酶活性。

本发明的单克隆抗体，当与适宜的基质结合时，就会给出一种能从生物原料中提纯出人类尿激酶或其单链前体的免疫吸附剂基质。这些免疫吸附剂，因为具有抗体对其抗原的最佳的亲和力，所以也特别适于工业上提纯人类尿激酶或其单链前体。

本发明的单克隆抗体，还特别适用于检测大分子量人类尿激酶（HMW尿激酶）或其单链前体的分析方法。例如以免疫荧光为基础的检测方法，放射性免疫检测方法和酶学免疫检测方法。

人类尿激酶是已知的血纤维蛋白溶酶原的激活物（PA），主要由肾细胞产生。

其主要生理学作用可能是作为血纤维蛋白系统的一种激活物，因而可用尿激酶治疗急性的血管病。例如心肌梗死，中风，肺栓塞，深部静脉血栓形成，外周动脉阻塞，出血及视网膜静脉阻塞。

血纤维蛋白溶酶原激活物（PA）是可将血纤维蛋白溶酶原转变成血纤维蛋白溶酶的丝氨酸蛋白酶，其为一种对血凝块的主要成分血纤维蛋白有高度特异性的蛋白酶。至少已自培养的肿瘤细胞系中分离出的两种不同类型的免疫学的PA：即与组织血纤维蛋白溶酶原激活物（TPA）有关的PA（参见Rijken    D.C.，Wijngaard    G.Iaal-de    Jong    M. ，Welbergen    J[1979]Biochim    Biophys    Acta    380，140）和与尿的激活物（UPA）有关的PA（又称尿激酶）（参见Williams    J.R.B.[1951]    Br.J.Exp.Pathol    39.530）。

这一种尿激酶类型物最初是以两条链之蛋白质的形式从尿中提纯出来的，而近来则以酶原形式（称作原尿激酶），从人类表皮样癌细胞株HEp3（参见Wun    T.D.，Ossowsky    L.和Reich    E.[1982]J.Biol    Chem，257，7262）glyoblastoma    细胞（参见Nielsen    L.S.等人，[1982]Biochem    21，6410）尿（参见Husain    S.C.等人，[1983]AArch    Biochem    Biophys    220，31）以及人肾永久细胞系TCL-598（参见Kohno    T.等人[1984]Biotechnol    2，628）中分离得到。最近，也已从人类拟表皮癌细胞系A431的上清液中鉴定出了一种免疫学上与尿激酶有关的酶原。

这种原尿激酶酶原是一种分子量为50-54000的单链蛋白质，没有或有很低的酰胺基分解活性，具有高度血纤维蛋白亲和力，它对二异丙基氟磷酸盐的处理有抗性，可被血浆抑制剂失活（参见Gurewich等人[1984]J.Clin    Invest    73    1731），并且用血纤维蛋白溶酶处理可转换成有两条链的活性酶（尿激酶）。

人类尿激酶分子已被以几种活性形式分离出来，但主要是高分子量形式（分子量约54000）和低分子量形式的（分子量约33000）。低分子量形式（LMW）是由大分子量形式（HMW）经酶切转换而来的。

高分子量形式由分子量为30，000的重链（B链）和分子量为20，000的轻链（A链）以二硫链连接而成。低分子量形式则由包含活性位点的整个B链和一条由A链转化而来的蛋白水解抗性小片段（MW＝2427）以二硫链连接而成。A链经蛋白水解而分成一条分子量18000的片段和一条分子量大于2427道尔顿的片段。

就其在体内促进血块分解的活性而言，似乎低分子量的尿激酶不如高分子量尿激酶（M.Samama等人，Thromb.Haemostas.40，578-580，[1979]和G.Hurano等人，Blood，55，430-436[1980]）。目前，人类尿激酶主要是用常规纯化技术从生物原料中获得，例如从人尿，组织培养物，特别是正常的或肿瘤性的肾细胞培养物中得到。人类尿激酶酶原一旦被激活，可以起到与尿激酶相类似的生理学作用。近来，对用DNA技术制备人类尿激酶已有报道（参见欧洲公开专利申请92182号（Eur.Pat.Appln.Publ）]。